概述
固紫B是一种棕黄色偶氮染料，可溶于极性及非极性溶剂，当前其主要用于偶氮偶联法中性粒细胞碱性磷酸酶染色，也可作为呈色剂用于电泳法中血清AST同工酶检测。偶氮染料等纺织染料用于生物细胞化学染色由来已久，最初由Enrlish首创，并将其应用于血液及骨髓细胞染色，Kass等不断深入研究并取得满意效果，国内李顺义等发现耐晒黑G、碱性品蓝可分别对粒细胞和巨核细胞特异性着色[1-2]。上述研究均是关于造血细胞的染色，而有关BMsC细胞化学染色研究鲜见报道。基于此本研究建立了将偶氮染料固紫B盐应用于BMSC的特异性细胞化学染色方法。
具体应用
建立骨髓基质细胞(BMsc)固紫B盐细胞化学染色法，并评估其临床应用价值。方法将传代培养的BMSC、骨髓、胸腔积液及腹腔积液标本制成涂片，行固紫B盐染色，观察细胞的着色情况及阳性BMsc形态特征，计数和比较再生障碍性贫血组(从)、增生性贫血组与健康对照组骨髓标本的BMsc数；并以健康对照组BMsc数的下限值作为从的诊断界点，随机双盲法评估该方法的诊断价值，计算敏感度、特异度、阳性似然比及阴性似然比。结果BMSC胞质染成紫红色，胞核不着色，其他细胞(粒、红、巨三系，单核、巨噬细胞，淋巴细胞，浆细胞，问皮细胞等)均不染色；从组BMsc计数为(1.07±0.29)个，增生性贫血组为(2.26±0．37)个，健康对照组为(1.58±0.33)个，从组BMsc计数明显低于增生性贫血组和健康对照组(g值分别为24.29、8.83，P均<0.01)，健康对照组低于增生性贫血组(g=16.41，P<0.01)；本法诊断从的敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比分别为90％、93％、12.86、0.11。结论固紫B盐染色方法操作简便，特异性强，对骨髓的增生程度评价及贫血的鉴别诊断具有较高的诊断价值。
应用过程
（1）标本采集：吸取患者骨髓、胸腔积液或腹腔积液50山制成涂片。健康对照者骨髓液2 ml，采用Percoll密度梯度分离法分离并培养BMSC，细胞按1：3比例传代，传代培养4代后用胰酶消化，洗涤，得单个核细胞悬液，约3×106／ml，室温下560×g离心5 min。弃上清液，细胞沉淀混匀，推片。
（2）固紫B盐染色：上述新鲜干燥标本于固定液固定30 s，小水流冲洗后晾干，置入l g／L固紫B盐PBS溶液(pH 7．2—7．6)，37℃水浴箱内置30 IIlin，流水冲洗1 min，晾干后苏木精复染2 min，流水冲洗，待干。镜下观察细胞的着色情况及阳性BMSC形态特征，并计数贫血组、健康对照组和随机双盲法选取的150份骨髓标本全片的BMSc阳性数。
传代BMSC固紫B盐染色后，低倍镜下可见弥漫阳性的BMSC；油镜下观察BMSC胞核不着色，胞质呈紫红色，并见阳性颗粒(图1)。而以固红RC、固红GG盐、固红VR盐、固红ITR盐、固蓝B盐、固蓝RR盐、固蓝BB盐、固紫酱GBC盐染色作对比观察，均未见阳性细胞。
（3）诊断效能评估：以健康对照组骨髓标本BMSC数的下限值作为诊断AA的参考上限，并以临床诊断AA的标准作为金标准，评估该方法诊断AA的敏感度、特异度、阳性似然比及阴性似然比。
（4）统计学分析：采用SPSS 11.5软件进行统计学分析。首先对实验数据进行正态性检验，若实验数据呈偏态分布，则用中位数及百分位数表示：肘(P25，P75)；经对数转换后，若呈正态分布，均数比较采用方差分析及q检验。P<0.05为差异有统计学意义。
研究意义
通过对常用偶氮染料的广泛筛选，发现固紫B盐可使BMsc着色，经过系列实验，如改变固定液种类、固定时间、pH值、染色时间及缓冲液等，建立并优化了固紫B盐对BMSc特异染色的各项参数(如pH 7．2—7．6的PBS缓冲液)。固紫B盐染色后BMSC胞核不着色，胞质丰富，呈紫红色，而其他细胞均无此染色特征；以固红RC盐、固红GG盐、固红VR盐、固红ITR盐、固蓝B盐、固蓝RR盐、固蓝BB盐、固紫酱GBC盐染色作对比观察，均未见阳性细胞；另外本方法简便快速，整个操作过程仅需30min，染色明显，对陈旧标本也易着色，染色液配置后可较长时间保存，染色结果保留数月也不褪色。
参考文献
[1]李顺义，张静，刘继平，等．纺织染料耐晒黑G染色在血细胞研究中的应用．中华血液学杂志，1993，14：595-596．
[2]郝冀洪，朱芸，张静，等．巨核细胞新染色方法及其临床应用研究．中华检验医学杂志，2005．28：915-918．