背景[1-3]
HUNS1人多发性骨髓瘤贴壁细胞系是一种人多发性骨髓瘤贴壁细胞系，源自一名患者的骨肉瘤组织。这种细胞系具有多发性骨髓瘤的典型特征，包括骨髓中浆细胞的异常增殖和产生单克隆免疫球蛋白。
HUNS1细胞系通常在含有优质胎牛血清、抗生素和生长因子的培养基中生长，例如RPMI-1640或DMEM等。这种细胞系需要在塑料培养容器中培养，并保持贴壁状态。
HUNS1人多发性骨髓瘤贴壁细胞系
HUNS1人多发性骨髓瘤贴壁细胞系细胞培养操作
1)复苏HUNS1人多发性骨髓瘤贴壁细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)HUNS1人多发性骨髓瘤贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)HUNS1人多发性骨髓瘤贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
HUNS1人多发性骨髓瘤贴壁细胞系可以用于Pin1对多发性骨髓瘤细胞调控作用及机制研究
探讨Pin1对HUNS1人多发性骨髓瘤贴壁细胞系增殖的调控及其机制,证明Pin1是多发性骨髓瘤的良好治疗靶点。
研究方法利用GEO数据库分析Pin1基因在健康供者及多发性骨髓瘤患者中的差异表达及其临床预后价值。构建Pin1过表达或沉默骨髓瘤细胞株研究Pin1基因对HUNS1人多发性骨髓瘤贴壁细胞系增殖、迁移、侵袭及体内成瘤能力的影响。利用双荧光素酶基因报告实验和免疫印迹法探索Pin1基因对多发性骨髓瘤细胞中NF-κB和Wnt/β-catenin通路转录活性及表达的影响。观察Pin1分子抑制剂API-1对多发性骨髓瘤细胞的杀伤作用。
研究结果GEO数据表明骨髓瘤患者Pin1基因表达量明显高于健康供者(p<0.05),并且Pin1水平随着浆细胞疾病的进展而上升,浆细胞白血病患者表达量最高,骨髓瘤患者次之,而MGUS患者较低。高表达Pin1骨髓瘤患者的总生存期和无疾病进展期明显低于低表达Pin1患者(p<0.05)。过表达Pin1后HUNS1人多发性骨髓瘤贴壁细胞系增殖、迁移、侵袭、NF-κB和Wnt/β-catenin通路的转录活性增强(p<0.05);沉默Pin1后骨髓瘤细胞增殖、迁移、侵袭、NF-κB和Wnt/β-catenin通路的转录活性明显减弱(p<0.05)。Pin1抑制剂API-1可抑制骨髓瘤细胞增殖、迁移、侵袭及体内成瘤能力(p<0.05)。结论本研究表明Pin1在多发性骨髓瘤患者中高表达,与其不良预后密切相关。Pin1促进骨髓瘤细胞增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为,是多发性骨髓瘤潜在的治疗靶点。
参考文献
[1]Pin1 inhibition reverses the acquired resistance of human hepatocellular carcinoma cells to Regorafenib via the Gli1/Snail/E-cadherin pathway[J].Jichuang Wang;;Nan Zhang;;Qi Han;;Wenxian Lu;;Long Wang;;Dayun Yang;;Min Zheng;;Zhenzhen Zhang;;Hekun Liu;;Tae Ho Lee;;Xiao Zhen Zhou;;Kun Ping Lu.Cancer Letters,2018
[2]The impact of NF-κB signaling on pathogenesis and current treatment strategies in multiple myeloma[J].Vrábel Dávid;;Pour Luděk;;ŠevčíkováSabina.Blood Reviews,2018
[3]NF-kappaB-inducing kinase in cancer[J].Gunter Maubach;;Michael H.Feige;;Michelle C.C.Lim;;Michael Naumann.BBA-Reviews on Cancer,2018
[4]Wnt/β‐Catenin Signaling Activates Expression of the Bone‐Related Transcription Factor RUNX2 in Select Human Osteosarcoma Cell Types[J].Oscar A.Vega;;Claudia M.J.Lucero;;Hector F.Araya;;Sofia Jerez;;Julio C.Tapia;;Marcelo Antonelli;;Flavio Salazar‐Onfray;;Facundo Las Heras;;Roman Thaler;;Scott M.Riester;;Gary S.Stein;;Andre J.van Wijnen;;Mario A.Galindo.Journal of Cellular Biochemistry,2017(11)
[5]张宏毫.Pin1对多发性骨髓瘤细胞调控作用及机制研究[D].南方医科大学,2021.