背景[1-3]
封闭用驴血清(原液)采集自正常健康的驴供体，经过滤等处理，适用于免疫组化或者免疫荧光实验中样本的封闭。封闭血清适用于免疫组化或者免疫荧光实验中样本的封闭。可以封闭待检样本中与蛋白质非特异性结合的位点，另外还可以封闭样品中内源性的Fc片段结合位点，阻断抗体与样品中的Fc受体结合，从而降低背景，减少假阳性。在选择封闭血清时，要注意封闭用血清中不能含有目标蛋白，且封闭血清来源不能与一抗来源相同，可用与二抗相同来源的封闭血清。
在免疫组化或者免疫荧光实验中封闭步骤可减少一抗和二抗与非靶标位点进行非特异性结合时所产生的本底信号。理想情况是，封闭剂将占据样本中的“黏性”位点，比如暴露的带电性或疏水性蛋白表面，同时不会干扰一抗/二抗识别靶表位，从而尽可能提高信噪比(S/N)。
封闭用驴血清(原液)
封闭用驴血清(原液)使用方法：
将封闭用驴血清(原液)从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2～8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。如果开盖后未使用完，建议存放于4℃，但请勿超过一个月。
1）免疫组化：用5-10%封闭用驴血清(原液)封闭（1:10-1:20倍稀释），室温孵育5-10分钟。清除血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃室温孵育或4℃过夜。
2）细胞涂片：用5-10%封闭用驴血清(原液)清封闭（1:10-1:20倍稀释），使用PBS（0.01 mol/L pH 7.4）稀释，少量点滴覆盖细胞涂片即可。
3）ELISA：使用PBS 1:100倍稀释封闭用驴血清(原液)（PBS，0.01mol/L pH7.4）37℃孵育一小时。
应用[4][5]
封闭用驴血清(原液)可以用于致犊牛肺炎和关节炎牛支原体诊断方法的建立
研究在牛支原体新疆分离株分离鉴定完成的基础上，分别从病原学、血清学及分子生物学角度出发建立了三种不同的快速检测方法，以期更加全面、准确地对该病作出诊断。
本论文的研究结论如下：1.M.bovis间接免疫酶标组织化学方法的建立。分别以鸡抗M.bovisIgY、以封闭用驴血清(原液)为封闭液，羊抗鸡IgG-HRP为一抗和二抗，对牛支原体菌体涂片、牛支原体阳性肺组织切片进行免疫组化染色，通过条件优化，建立了M.bovis间接免疫组化检测方法，用该方法对病死犊牛病料进行检测，并以细菌分离培养和PCR方法进行验证，检测结果与分离培养和PCR结果一致，具有特异性和可靠性。2.M.bovis间接ELISA检测方法的建立。以M.bovis全菌体蛋白经超声波裂解后的裂解物作为包被用抗原，通过棋盘滴定法确定抗原的最适包被浓度为200ug/mL，待检血清最佳稀释度为1:100，同时对抗原的包被方式、酶标二抗最佳工作浓度、一抗和二抗最佳作用时间等进行了优化，建立了检测M.bovis血清抗体的间接ELISA方法，用该方法检测牛布鲁氏菌病、牛病毒性腹泻粘膜病抗血清均无交叉反应，表明该间接ELISA具有很好的特异性。3.基于牛支原体P81基因环介导等温扩增方法的建立及与巢式PCR灵敏度的比较。根据GeneBank中登录的M.bovisP81基因序列设计特异性引物，通过条件优化，建立了M.bovis环介导等温扩增（LAMP）检测方法。将该方法的灵敏度与巢式PCR进行对比，并用其检测牛支原体外的其他几种病原菌，同时对疑似感染M.bovis的临床病料进行检测。该方法的灵敏度比巢式PCR高103倍，最低检出限为1.1fg/uL，对其他几种病原菌的检测结果均为阴性，临床病料检测结果与分离培养符合率为100%。
参考文献
[1]Mycoplasma bovis Infections in Young Calves[J].Fiona P.Maunsell;;G.Arthur Donovan.Veterinary Clinics of North America:Food Animal Practice,2009(1)
[2]Rapid detection of Mycoplasma bovis in milk samples and nasal swabs using the polymerase chain reaction[J].H.Hotzel;;K.Sachase;;H.Pfützner.Journal of Applied Microbiology.1996
[3]Innate Immune Response to Intramammary Mycoplasma bovis Infection[J].A.C.W.Kauf;;R.F.Rosenbusch;;M.J.Paape;;D.D.Bannerman.Journal of Dairy Science,2007(7)
[4]Evaluation of PCR systems for the identification and differentiation of Mycoplasma agalactiae and Mycoplasma bovis:A collaborative trial[J]..The Veterinary Journal,2004(2)
[5]金云云.致犊牛肺炎和关节炎牛支原体诊断方法的建立[D].石河子大学,2013.