背景[1-3]
AKR1C2抗体是一种可以特异性结合CCT2的人工合成抗体，可以靶向结合人、小鼠、大鼠和猪样品中的CCT2蛋白。LIMK-1单克隆抗体适用于Western印迹(WB)、免疫沉淀(IP)、免疫荧光(IF)、石蜡包埋切片免疫组化(IHCP)、流式细胞术(FCM)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。醛-酮还原酶家族1成员C2(AKR1C2)是庞大的醛-酮还原酶超家族的成员，该超家族以NADPH依赖性方式代谢一系列底物。AKR1C2是负责将雄激素5α-二氢睾酮(DHT)代谢并失活成3α-雄烷二醇的3-α-羟基类固醇脱氢酶(3α-HSD)。研究证实，在晚期前列腺癌病例中AKR1C2表达增加。AKR1C2和相关的还原酶AKR1C3均通过将前列腺素D2还原成更稳定的9α,11β-PGF2α，增强前列腺癌中的PI3K/Akt信号转导(2)。此外，研究证实一些卵巢子宫内膜异位症标本中AKR1C2表达增加，表明AKR1C2参与促进卵巢子宫内膜异位症中的孕酮代谢。
AKR1C2抗体
AKR1C2抗体使用步骤（Western Blot）：
1.样本制备
1）融解RIPA裂解液（RIPA裂解液-细胞/组织裂解液缓冲液），混匀。
2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入150-250μL裂解液的比例加入裂解液。
3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
2.蛋白电泳
1）取出预制胶，将预制胶固定在电泳槽中，内槽加满tris-glycine电泳缓冲液。
2）在室温或不超过37℃的水浴中溶解5XSDS-PAGE上样缓冲液。水浴溶解后立即室温存放。
3）混合蛋白样品和5XSDS-PAGE蛋白上样缓冲液。
4）100℃或沸水浴加热3-5min，以充分变性蛋白，之后冷却至室温备用。
5）上样蛋白，并在1个孔中上样蛋白marker，盖上电泳槽盖，打开电源，电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
6）电泳后取出胶板，用刀在侧边硅胶处，沿着两片玻璃缝隙切开硅胶，即可打开玻璃板；取胶时。
3.转膜与封闭
1）将胶浸于预冷的转膜缓冲液中平衡5min。
2）依据胶的大小剪取膜和滤纸6片，放入预冷的转膜缓冲液中平衡10min，如用PVDF膜，需参照说明书，先用纯甲醇浸泡1-2min，再孵育于预冷的转膜缓冲液中。
3）装配转移三明治：海绵/3层滤纸/胶/膜/3层滤纸/海绵，每层放好后，用试管赶尽气泡。
4）将转移槽置于冰浴中，放入三明治，膜靠近阳极，胶靠近阴极，加入转移缓冲液，插上电极，100V，1h（电流约为0.3A）。
5）转膜结束后，切断电源，取出膜。
6）将膜浸没在5mL丽春红染色液中，置于轨道摇床上室温染色5~10min或更长，直待膜上显示出蛋白条带。
7）清洗：取出膜，用蒸馏水，PBS或者其他适当溶液冲洗至背景清晰后拍照，大概冲洗2~3次，每次5min。
8）脱色：将膜放到0.1N NaOH溶液漂洗5min；倒去洗脱液，再重复一次。
9）清洗：再用蒸馏水清洗膜2~3次，每次5min。
10）将膜置于25mL封闭缓冲液中，在室温下孵育1小时。
11）用5mL TBST洗涤三次，每次15min。
4.抗体孵育与检测
1）将膜和一抗（AKR1C2抗体按照产品应用推荐稀释度）置于10mL一抗稀释缓冲液中在4℃下孵育过夜并不时轻轻晃动。
2）用5mL TBST洗涤三次，每次15min以去除残留的一抗(AKR1C2抗体)。
3）将膜和二抗（按照产品应用推荐稀释度）置于10mL封闭缓冲液中孵育1-2小时并不时轻轻晃动。
4）用5mL TBST洗涤三次，每次15min。
5）最后一次洗膜的同时，按照ECL超敏试剂盒说明书，新鲜配制发光工作液。
6）用平头镊取出膜，搭在滤纸上沥干洗液。将膜完全浸入发光工作液中，与发光工作液充分接触。室温孵育3min，准备立即压片曝光。但勿洗去发光液。
7）显影曝光。
应用[4][5]
AKR1C2抗体可以用于启东肝癌中AKR1C2基因的突变、表达特征及其致癌机制研究
以AKR1C2（Aldo-Keto ReductaseⅠCⅡ）序列（AB02165）为信息探针，利用生物信息学同源筛选的方法，拚接其全长序列，对其结构与功能进行预测。以乙型肝炎病毒（HBV）感染、黄曲霉毒素B1（AFB1）污染、P53基因高度突变为主因的启东高发区肝癌患者（共170例）及启东肝癌细胞株QGY7703为研究对象，以AKR1C2为目标基因，参照生物信息学模拟分析结果，借助分子细胞生物学手段，如RT-PCR、Northern blot、Southern blot、western blot、5’、3’-RACE、PCR-SSCP、直接序列分析、免疫组化、原位杂交、多克隆抗体的制备、真核转染、基因框移突变的构建、体内外致瘤能力测定、基因表达芯片、反义基因转染、免疫共沉淀、酵母双杂交等，对AKR1C2基因在启东肝癌及其癌旁组织中的突变、表达特征及其致肝癌机制进行研究。
本研究中RACE分析结果显示：AKR1C2 cDNA全长序列为1865bp，5’非编码序列为253bp，3’非编码序列为640bp，起始密码子为ATG，终止密码子为TAA，开放阅读框（ORF）为972bp。所扩增的长度为的985bp的AKR1C2基因的片段（以ORF设计引物），用同位素掺入标记做为杂交探针，与印有36种人类组织mRNA的MTN膜进行Northern杂交。结果显示人类AKR1C2基因的表达谱：心、胎盘、直肠、肝、骨骼肌、卵巢、前列腺、大肠、盲肠、胸腺、睾丸、附睾、输卵管、盲肠、鼻、乳房、胃组织中AKR1C2中均检出一种大约为1.9kb的剪接本，在毛发组织中检出一种大约为1.2kb的剪接本。在肝脏、前列腺、大肠、盲肠、附睾、输卵管中表达远远高于其它组织，即存在一定的组织表达特异性。迭加AKR1C2-GFP及抗-线粒体荧光染色结果，显示其定位于线粒体膜上。AKR1C2 cDNA原核表达产物经变性、复性、纯化后，确定为42Ku，其等电点为7.5，并经Western blot、等电聚焦凝胶电泳证实。免疫兔后产生的抗体滴度为1:10000（ELISA测定）。抗血清纯化后，以l:2000，1:4000，l:5000稀释，经AKR1C2抗体Western blo七证实该抗体在42Ku处出现一条带。为了检测AKR:CZ蛋白在人不同肿瘤细胞系中的表达情况，选取人食管癌细胞系EC8712、人前列腺癌细胞系DU-450和TSU-pZ、人结肠癌细胞系HR8348、人肝癌细胞系BEL74OZ、人肝癌细胞系QGY7703、人肺腺癌细胞系GLC82和LTEP-aZ，并经常规培养后提取其蛋白。AKR1C2抗体Western blot分析表明，在42Ku处出现印迹带。
参考文献
[1]Bromodomain:an acetyl-lysine binding domain[J].Lei Zeng;;Ming-Ming Zhou.FEBS Letters,2002(1)
[2]Genome wide detection of oncogene amplifications in nasopharyngeal carcinomaby array based comparative genomic hybridization[J].Angela Hui;;Kwok-Wai Lo;;Peter Teo;;Ka-Fai To;;Dolly Huang.International Journal of Oncology,2002(3)
[3]Overexpression of the mouse Fas gene in human Hep3B hepatoma cells overcomes their resistance to Fas-mediated apoptosis[J].Christelle Lamboley;;Annie-France Bringuier;;Emmanuel Camus;;Bernard Lardeux;;AndréGroyer;;Gérard Feldmann.Journal of Hepatology,2002(3)
[4]Proteomic analysis of differential protein expression in human nasopharyngeal carcinoma cells induced by NAG7 transfection[J].ChenTan;JiangLi;JieruWang;QiuXiang;XiaomeiZhang;LiDong;ShourongShen;SongpingLiang;GuiyuanLi.Proteomics,2002(3)
[5]陆东东.启东肝癌中AKR1C2基因的突变、表达特征及其致癌机制研究[D].南京师范大学,2003.