介绍
4,5-二氯-1,2-苯二胺（4,5-Dichloro-1,2-benzenediamine）是一种含氯芳香族二胺化合物，在霉菌毒素检测的衍生化反应中具有重要应用。
4,5-二氯-1,2-苯二胺
应用
作为衍生化试剂
原始毒素极性强、分子量低，直接进行LC/MS检测灵敏度不足。通过与4,5-二氯-1,2-苯二胺反应生成衍生化产物，可改善检测灵敏度和选择性。可以用于霉菌毒素串珠镰刀菌素（Moniliformin）的检测。串珠镰刀菌素是一种由镰刀菌产生的毒素，具有心肌毒性，需通过高灵敏度分析方法（如液相色谱 - 质谱联用技术）进行痕量检测。
衍生化反应机制
在酸性条件下（如 HCl 溶液），串珠镰刀菌素的羰基与4,5-二氯-1,2-苯二胺的氨基发生缩合反应，预期生成含杂环结构的衍生物（分子量为238），并通过荧光检测定量。实际反应中通过LC/MS检测到分子量为228的未知产物（比预期少10个质量单位），推测其结构为脱除一分子水和一氧化碳后的杂环化合物。产物离子谱显示质子化分子离子峰（m/z 229），经碰撞诱导裂解后生成离子峰m/z 187（丢失烯酮）和m/z 152（丢失Cl⁻），支持杂环结构的断裂路径。在芳香区（8.2–8.4 ppm）观察到特征质子信号，结合谱图模拟软件，确认产物，其质子化学位移与理论预测吻合。
反应条件
4,5-二氯-1,2-苯二胺需通过盐酸重结晶纯化，避免杂质干扰。使用LC/MS/M6S（三重四极杆质谱）和LC/NMR（600 MHz 核磁共振仪）联用技术进行分离与结构解析，流动相含0.01%三氟乙酸以增强离子化效率。将毒素与苯二胺在2 M HCl中于60°C反应3小时，蒸发溶剂后用流动相溶解，过滤后进行仪器分析。推翻了最初基于类似化合物（方酸）提出的结构假设，确认实际产物为脱羰杂环化合物，反应过程包括迈克尔加成、环化缩合及脱羰步骤。该衍生化反应可显著提高串珠镰刀菌素的检测灵敏度至亚ppb级，为食品和饲料中毒素的痕量分析提供了可靠手段。但也存在一定局限性，反应中生成少量同分异构体（保留时间11.6 min），因丰度低无法通过MS/MS和NMR进一步解析[1]。
参考文献
[1]Peter Z ,Annette L ,Klaus A , et al.Derivatization reaction of the mycotoxin moniliformin with 1,2‐diamino‐4,5‐dichlorobenzene: structure elucidation of an unexpected reaction product by liquid chromatography/tandem mass spectrometry and liquid chromatography/nuclear magnetic resonance spectroscopy[J].Journal of Mass Spectrometry,2003,38(7):709-714.