背景[1-3]
小鼠钙通道阻滞剂(CCB)Elisa试剂盒用于测定血清，血浆及相关液体样本中小鼠钙通道阻滞剂(CCB)的含量。
小鼠钙通道阻滞剂(CCB)Elisa试剂盒原理：应用双抗体夹心法测定标本中小鼠钙通道阻滞剂(CCB)水平。用纯化的小鼠钙通道阻滞剂(CCB)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入样本及标准品，再与HRP标记的大鼠前列腺素E1(PGE1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠钙通道阻滞剂(CCB)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠钙通道阻滞剂(CCB)浓度。
小鼠钙通道阻滞剂(CCB)Elisa试剂盒
小鼠钙通道阻滞剂(CCB)Elisa试剂盒样品收集、处理及保存方法
1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4）组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
小鼠钙通道阻滞剂(CCB)Elisa试剂盒使用前准备
1）标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
2）洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
小鼠钙通道阻滞剂(CCB)Elisa试剂盒操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
小鼠钙通道阻滞剂(CCB)Elisa试剂盒可以用于氨氯地平联合5-fu对小鼠肝癌H22体内体外作用的实验研究
钙通道阻滞剂（CCB）与化疗药物联合应用的研究日益增多。大量的研究表明,抗癌药物与CCB联合可以增强抗癌药物对多系统肿瘤细胞的细胞毒作用,对多药耐药肿瘤细胞可致耐药逆转。与其他的钙通道阻滞剂相比氨氯地平具有良好的抗肿瘤细胞增殖的潜能。
研究氨氯地平（amlodipine）联合5-Fu对小鼠腹水型肝癌细胞株H22的联合抑制效应以及两药对小鼠H22肝癌腹水瘤及实体瘤的抑瘤效应。
方法:采用小鼠腹水型肝癌细胞株H22,经氨氯地平（3.125～50μmol/L）及5-Fu（12.5～200μg/mL）单独及联合作用24、48、72小时后,采用小鼠钙通道阻滞剂(CCB)Elisa试剂盒检测氨氯地平剩余浓度，采用MTT法检测药物对H22细胞生长的抑制作用,计算两药的中效浓度（IC50）及合用指数CI;流式细胞仪（FCM）检测药物单独及联合作用18h后的凋亡情况以及药物作用48h后的细胞周期分布;免疫细胞化学法检测药物单独及联合作用48h后H22细胞Bcl-2、Bax的表达情况。将昆明种小鼠右腋皮下及腹腔接种H22肝癌细胞建立小鼠移植肿瘤模型后,随机将小鼠分为四组:生理盐水组（对照组）,氨氯地平组(10mg·10g-1·d-1),5-Fu组(第3,6,9天腹腔注射5-Fu溶液,10mg·10g-1·d-1)和氨氯地平+5-Fu组(氨氯地平灌胃给药10mg·10g-1·d-1,第3,6,9天腹腔注射5-Fu溶液,10mg·10g-1·d-1),连续10d,观察移植瘤体重量、腹水瘤小鼠生存时间,计算抑瘤率以及生命延长率。
结果:（1）氨氯地平、5-Fu单独及联合作用对小鼠肝癌细胞的生长均有显著的增殖抑制作用,并呈明显的剂量和时间依赖性;两药联合应用时,当药物效应（抑制率）小于95﹪时,具有协同作用（CI﹤1）。（2）流式细胞检测结果显示氨氯地平、5-Fu单独及联合作用均可诱导H22细胞凋亡,与对照组比较,各实验组细胞凋亡率明显增加,合用组与单用组比较,凋亡率明显增加。
参考文献
[1]Mitochondrial calcium signalling and cell death:Approaches for assessing the role of mitochondrial Ca 2+uptake in apoptosis[J]..Cell Calcium,2006(5)
[2]A Calmodulin-Binding Site on Cyclin E Mediates Ca2+-Sensitive G1/S Transitions in Vascular Smooth Muscle Cells[J].Jaehyun Choi;;Andrew Chiang;;Nicolas Taulier;;Robert Gros;;Asif Pirani;;Mansoor Husain.Circulation Research,2006(10)
[3]Antiproliferative effect of Ca 2+channel blockers on human epidermoid carcinoma A431 cells[J].Junko Yoshida;;Takaharu Ishibashi;;Matomo Nishio.European Journal of Pharmacology,2003(1)
[4]Ca 2+signal blockers can inhibit M/A transition in mammalian cells by interfering with the spindle checkpoint[J].Naihan Xu;;Kathy Q Luo;;Donald C Chang.Biochemical and Biophysical Research Communications,2003(3)
[5]罗兰.氨氯地平联合5-fu对小鼠肝癌H22体内体外作用的实验研究[D].重庆医科大学,2009.