链霉亲和素(Streptavidin)是一种来源于阿维丁链霉菌(Streptomyces avidini)分子量约为66 kDa的四聚体蛋白。主要特点是每个亚基均可结合一个生物素分子,且该结合是高特异性以及超强非共价相互作用(Kd≈10-15 M)。

应用
1. 蛋白质和核酸的检测与纯化(如亲和层析、Pull-down)
2. 免疫分析(如ELISA、Western blot)
3. 细胞和组织标记(原位杂交)
4. 药物靶向递送
5. 生物传感器开发
应用示例
案例一:链霉亲和素-生物素系统在ELISA检测中的应用
操作步骤:
1. 包被抗体
将捕获抗体稀释后包被于ELISA板,4℃过夜。
2. 封闭
用含BSA的封闭液封闭非特异性结合位点,室温1小时。
3. 加入待测样品
孵育1-2小时,洗涤去除未结合物质。
4. 加入生物素标记的检测抗体
孵育1小时,洗涤。
5. 加入链霉亲和素-HRP(辣根过氧化物酶)
孵育30分钟,洗涤。
6. 显色反应
加入TMB底物,显色后加入终止液,测定OD值。
案例二:链霉亲和素磁珠在蛋白质纯化中的应用
操作步骤:
1. 生物素标记抗体制备
将特异性抗体用生物素标记试剂标记。
2. 磁珠预处理
链霉亲和素磁珠用PBS洗涤,去除保存液。
3. 抗体与磁珠结合
将生物素标记抗体与磁珠孵育30分钟,形成磁珠-抗体复合物。
4. 样品孵育
加入待纯化蛋白样品,孵育1小时。
5. 磁性分离
磁力架吸附磁珠,去除未结合蛋白。
6. 洗涤与洗脱
用洗涤液洗涤磁珠,最后用洗脱液洗脱目标蛋白。
7. 检测
如SDS-PAGE等。