​链霉亲和素都有哪些应用?

2025/8/18 17:26:33 作者:小满

链霉亲和素(Streptavidin)是一种来源于阿维丁链霉菌(Streptomyces avidini)分子量约为66 kDa的四聚体蛋白。主要特点是每个亚基均可结合一个生物素分子,且该结合是高特异性以及超强非共价相互作用(Kd≈10-15 M)。

链霉亲和素

应用

1. 蛋白质和核酸的检测与纯化(如亲和层析、Pull-down)

2. 免疫分析(如ELISA、Western blot)

3. 细胞和组织标记(原位杂交)

4. 药物靶向递送

5. 生物传感器开发

应用示例

案例一:链霉亲和素-生物素系统在ELISA检测中的应用

操作步骤:

1.  包被抗体

将捕获抗体稀释后包被于ELISA板,4℃过夜。

2. 封闭

用含BSA的封闭液封闭非特异性结合位点,室温1小时。

3. 加入待测样品

孵育1-2小时,洗涤去除未结合物质。

4. 加入生物素标记的检测抗体

孵育1小时,洗涤。

5. 加入链霉亲和素-HRP(辣根过氧化物酶)

孵育30分钟,洗涤。

6. 显色反应

加入TMB底物,显色后加入终止液,测定OD值。

案例二:链霉亲和素磁珠在蛋白质纯化中的应用

操作步骤:

1.  生物素标记抗体制备

将特异性抗体用生物素标记试剂标记。

2. 磁珠预处理

链霉亲和素磁珠用PBS洗涤,去除保存液。

3. 抗体与磁珠结合

将生物素标记抗体与磁珠孵育30分钟,形成磁珠-抗体复合物。

4. 样品孵育

加入待纯化蛋白样品,孵育1小时。

5. 磁性分离

磁力架吸附磁珠,去除未结合蛋白。

6. 洗涤与洗脱

用洗涤液洗涤磁珠,最后用洗脱液洗脱目标蛋白。

7. 检测

如SDS-PAGE等。

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