背景[1-3]
禽流感病毒H7亚型(AIV-H7)核酸试剂盒(荧光-PCR法)基于荧光-PCR技术，通过特异性引物和探针扩增H7亚型禽流感病毒的RNA序列，实现快速、灵敏的病毒检测。该试剂盒适用于禽类组织、分泌物、排泄物及尿囊液等样本，用于H7亚型禽流感病毒的辅助诊断、流行病学调查及分子流行病学研究。
禽流感病毒（AvianInfluenzavirus，AIV）是禽流感的病原体，属于正黏勃病毒科，直径80~120nm，球形颗粒，基因组为8个节段的单链负义RNA，螺旋对称，对热、酸和有机溶剂敏感。病毒呈多形性，其中球形直径80～120nm，有囊膜。基因组为分节段单股负链RNA。依据其外膜血凝素（H）/和神经氨酸酶（N）蛋白抗原性的不同，可分为16个H亚型（H1～H16）和9个N亚型（N1～N9）。感染人的禽流感病毒亚型主要为H5N1、H9N2、H7N7，其中感染H5N1的患者病情重，病死率高。
禽流感病毒H7亚型(AIV-H7)核酸试剂盒(荧光-PCR法)
性能参数:
灵敏度:最低检测限可达10²-10³copies/mL，部分产品可检测至500 copies/mL或更低，满足低病毒载量样本的检测需求。
特异性:针对H7亚型禽流感病毒基因高度保守区设计引物和探针，与其他禽流感病毒亚型（如H5、H9）及常见病原体无交叉反应，特异性达100%。
检测范围:覆盖H7亚型禽流感病毒全基因组，支持定性检测（部分产品支持定量检测，线性范围达5个数量级）。
精密度:批内变异系数（CV）≤5%，重复检测结果稳定可靠。
适用仪器:
ABI、安捷伦、Roche、博日，朗基，柏恒等梯度PCR仪。
自备：无DNA/RNA酶的1.5mL离心管，0.2mL PCR反应管，滤芯吸头(规格:10μL，200μL，1000μL)，离心机，振荡混合器，各种规格的移液器。
操作步骤:
1.样品处理（样本处理区）
1.1样本前处理
1.2DNA提取
2.试剂配制（试剂准备区）
3.加样（样本处理区）
4.PCR扩增（核酸扩增区）
5.结果分析判定
检测方法的局限性
样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
应用[4][5]
禽流感病毒H7亚型(AIV-H7)核酸试剂盒(荧光-PCR法)可以用于表达H5和H7亚型禽流感病毒HA基因的mRNA疫苗的构建及免疫效力评估
H5和H7亚型高致病性禽流感病毒（HPAIV）一直被认为是公共卫生安全的巨大威胁。mRNA疫苗具有安全性高、翻译效率高、研发周期短等诸多优势,是新型禽流感疫苗研发的一个重要方向,其非翻译区（UTR）是mRNA的元件之一,在影响mRNA稳定性、提高翻译效率等方面起到重要作用。为探索可行的mRNA疫苗构建策略,本研究选择来自人β-球蛋白的部分基因序列作为UTR序列构建了骨架质粒p GEM,同时选择含有非洲爪蟾β-球蛋白的部分基因序列作为UTR序列的骨架质粒p XT7,以强型绿色荧光蛋白（e GFP）基因为目的报告基因,分别构建了中间转录质粒p GEM-e GFP和p XT7-e GFP。以中间转录质粒为模板通过体外转录制备了mRNA me GFP-p GEM和me GFP-p XT7,同时设商品化的EGFP mRNA作为对照,将3种表达e GFP的mRNA以相同剂量分别转染HEK293T细胞,通过禽流感病毒H7亚型(AIV-H7)核酸试剂盒(荧光-PCR法)及荧光蛋白表达水平差异比较mRNA翻译效率。
结果显示,转染了me GFP-p XT7的HEK293T细胞绿色荧光信号强度显著高于me GFP-p GEM,EGFP mRNA荧光信号强度最低。结果表明,本研究建立的2种mRNA构建策略均可制备出功能完整的mRNA,可作为后续mRNA疫苗的构建平台。
参考文献
[1]Genetic and biological properties of H7N9 avian influenza viruses detected after application of the H7N9 poultry vaccine in China.[J].Yin Xin;Deng Guohua;Zeng Xianying;Cui Pengfei;Hou Yujie;Liu Yanjing;Fang Jingzhen;Pan Shuxin;Wang Dongxue;Chen Xiaohan;Zhang Yaping;Wang Xiurong;Tian Guobin;Li Yanbing;Chen Yan;Liu Liling;Suzuki Yasuo;Guan Yuntao;Li Chengjun;Shi Jianzhong;Chen Hualan.PLoS pathogens.2021
[2]Multiple Reassortants of H5N8 Clade 2.3.4.4b Highly Pathogenic Avian Influenza Viruses Detected in South Korea during the Winter of 2020–2021[J].Baek YoonGi;Lee YuNa;Lee DongHun;Shin Jaein;Lee JiHo;Chung David H.;Lee EunKyoung;Heo GyeongBeom;Sagong Mingeun;Kye SooJeong;Lee KwangNyeong;Lee MyoungHeon;Lee YounJeong.Viruses.2021
[3]Application of HDR-CRISPR/Cas9 and Erythrocyte Binding for Rapid Generation of Recombinant Turkey Herpesvirus-Vectored Avian Influenza Virus Vaccines[J].Pengxiang Chang;;Faisal Ameen;;Joshua E.Sealy;;Jean-Remy Sadeyen;;Sushant Bhat;;Yongqing Li;;Munir Iqbal.Vaccines,2019(4)
[4]Nucleoside Modified mRNA Vaccines for Infectious Diseases.[J].Pardi Norbert;;Weissman Drew.Methods in molecular biology(Clifton,N.J.).2017
[5]杨佳欣.表达H5和H7亚型禽流感病毒HA基因的mRNA疫苗的构建及免疫效力评估[D].中国农业科学院,2023.