在有机化学和核酸化学的交叉领域，2’-OMe-U亚磷酰胺单体的化学合成是一个研究热点，该单体在RNA干扰技术、核酸药物开发及基因编辑技术中扮演着重要角色，对于推进基于RNA的治疗和生物技术至关重要，尤其是在合成RNA分子方面发挥着关键作用，常用于RNA干扰(RNAi)、反义寨核苷酸和mRNA治疗等应用，同时也为各种疾病提供潜在的治疗方法，包括遗传疾病、癌症和病毒感染。
制备方法[1]
S1：氮气保护下，将原料尿苷(8.5kg，1.0X)以及DMF(8.1kg,0.95X)加入到反应釜中。接着分批加入碳酸二茉酯(7.48kg，0.88X)以及碳酸氢钠(85g,0.01X)。将反应体系升温至115~125℃，保温搅拌6~7h反应完全。缓慢降温至20℃。有白色固体析出，过滤。将粗品用甲醇(13.6kg，1.6X)以及DMSO(1.7kg,0.2X)保温搅拌。降温过滤，固体用甲醇(1.7kg,0.2X)淋洗，收集湿品于鼓风干燥至恒重得到白色固体化合物1(7.24kg，收率:92%)。
S2：将DMF(12kg，3X)、吡啶(4.16kg，1.05X)和化合物1(3.95kg，1X，1.0 equiv.)加入反应瓶中，然后分四批加入DMTCl(7.13kg,1.8X，1.2equiv.)。将反应混合物在搅拌，加入碳酸氢钠(2.21kg,0.56X,1.5 equiv.)。用乙酸乙酯(20L)提取，有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，常压下浓缩以除去大部分乙酸乙酯，得到油状液体。将ACN(28Kg,7X)加入到油状液体中并搅拌。将浑浊的液体过滤后，得到白色粗品。用ACN(16Kg，4X)处理得到化合物3(7.59kg，纯度:99.7%，收率:78%)。
S3：将化合物3(753g，1.0equiv.)、Mg(136.76g，0.17X，4.0equiv.)、甲醇(800mL，1.0V)和叔丁醇(160mL，0.2V)加入反应瓶中。加入催化量的固体碘引发反应。搅拌约30min后，反应混合物发生严重放气和放热，当放热量较低时加入甲醇(3200mL,4V)，将反应混合物浓缩，搅拌30min后除去甲醇。然后获得灰色固体的化合物4(655g，纯度:99.0%，收率82%)。
S4：氮气保护下将磷试剂(97g,1.8equiv.)溶于无水DCM(10V)投至反应釜且在10℃下保温搅拌，另将原料化合物4(100g,1.0 equiv)溶于无水DCM(10V)中，并向其中加入DCI(10.5g,0.5equiv.)搅拌，将原料的混合体系缓慢滴加至反应釜中，反应混合液由浑浊状变为澄清。氮气鼓泡5min。缓慢升温至室温继续搅拌4h后HPLC检测原料<0.2%。减压浓缩掉大部分溶剂，将粗品溶于MTBE(20V)，加水(10V)，DMF(10V)萃取5次，最后加10%氯化钠(5V)洗涤，合并有机相并用无水硫酸钠干燥。减压浓缩掉溶剂，在氮气保护下，将得到的油状物用MTBE(20V)溶解，缓慢向-10℃的正庚烷(40V)体系中滴加，有白色固体产生，过滤得到2’-OMe-U亚磷酰胺单体为化合物5(101.83g，白色固体，收率:93%，纯度:99.24%，31P-NMR纯度:98%)。最终产品于-20℃、避光、充氮的条件下保存。
参考文献
[1]邱双杰. 2’--O--甲基核苷亚磷酰胺单体和3’--O--核苷琥珀酸三乙胺盐的合成研究[D]. 安徽:安徽大学,2024.