DHX8抗体是一类靶向DEAH-box螺旋酶8（DHX8）蛋白的特异性抗体，是研究DHX8蛋白功能、定位及相互作用的重要工具，广泛应用于细胞生物、表观遗传学等领域的实验研究。DHX8，又称DDX8、HRH1、PRP22等，DHX8抗体多为兔多克隆抗体，也有部分鼠源单克隆抗体。
应用研究
Campodonico E等人通过特异性去除酵母全细胞提取物中的内源性Prp22(DHX8)蛋白，构建DHX8缺陷型剪接反应体系，以便后续添加重组DHX8野生型、突变体及抑制突变体蛋白，验证其在mRNA释放、剪接体解聚中的功能。采用液氮法从BJ2168菌株制备全细胞提取物，该提取物包含pre-mRNA剪接所需的全套剪接体复合物及辅助因子；将DHX8抗体与酵母全细胞提取物共孵育,通过抗体特异性结合内源性DHX8蛋白，去除提取物中的功能性DHX8；在耗竭DHX8的提取物中，加入32P-GMP标记的肌动蛋白前体RNA，并分别补充野生型DHX8、突变体（T637A、H606A、R805A）或抑制突变体（T4、T7、H1等）蛋白；通过甘油梯度离心分离剪接体复合物与游离mRNA，经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影，定量分析成熟mRNA 的释放效率，以此判断不同DHX8蛋白变体的功能活性[1]。
通过DHX8抗体的免疫共沉淀结合质谱分析，发现DHX8与剪接体Bact复合物直接互作，敲低DHX8会导致异常剪接事件增加，该抗体为验证蛋白互作提供了特异性工具。DHX8（一种介导mRNA从剪接体释放的DEAH-box蛋白）可通过浓度依赖和ATP依赖的方式解旋RNA双链。这一结果证实DHX8能够直接修饰RNA结构。还发现DHX8依赖的mRNA从剪接体释放过程是ATP依赖的，且重组DHX8具有ATP酶活性。不可水解的ATP类似物无法在RNA解旋反应中替代ATP，表明该反应需要ATP水解的参与。对重组蛋白中一个推定的ATP磷酸结合基序进行特异性突变后，其ATP酶活性和RNA解旋能力均完全丧失。值得注意的是，这些数据表明，DEAH-box蛋白可直接作用于剪接体内的RNA底物[2]。
参考文献
[1]Campodonico E, Schwer B. ATP-dependent remodeling of the spliceosome: intragenic suppressors of release-defective mutants of Saccharomyces cerevisiae Prp22. Genetics. 2002 Feb;160(2):407-15. doi: 10.1093/genetics/160.2.407. PMID: 11861548; PMCID: PMC1461984.
[2]Wagner JD, Jankowsky E, Company M, et al. The DEAH-box protein PRP22 is an ATPase that mediates ATP-dependent mRNA release from the spliceosome and unwinds RNA duplexes.[J]. EMBO Journal,1998,17(10):2926-2937.