介绍
盐酸考尼伐坦(Conivaptan hydrochkoride)的分子式为C32H27ClN4O2，是一种精氨酸加压素(AVP) V1a和V2受体的非肽类双重抑制剂，主要用于血容量正常的低钠血症的治疗。
图一 盐酸考尼伐坦
对细胞的毒性
试验方法
1)取生长状态良好的CCL-94(猫肾细胞)进行消化传代，用细胞生长液调整细胞密度为1×105/mL，接种于96孔板，每孔100μL，置于37℃、5％CO2培养箱培养16h；
2)16h后，取出96孔板，弃去孔中培养基，无菌PBS清洗三次，甩干后每组第一纵列加入100μL细胞维持液，第二、三、四、五、六列加50μL细胞维持液；
3)在盖子上做好标记，按标记顺序每组第一纵列加入盐酸考尼伐坦，进行2倍倍比稀释，用排枪轻轻混匀十下，吸出50μL加入第二纵列，依次类推，最后混匀弃掉50μL。使盐酸考尼伐坦终浓度为200μM、100μM、50μM、25μM、12 .5μM、6 .25μM，同时设置未加入药物的细胞对照；
4)96h后，用CellTiter-Glo试剂进行细胞活力检测。计算公式：细胞存活率(％) ＝经药物处理的细胞发光值平均值/细胞对照组发光值平均值。
试验结果
结果见图二。测定细胞存活率能反应盐酸考尼伐坦对CCL-94细胞的毒性作用，从图中可以看出，盐酸考尼伐坦对CCL-94细胞的毒性作用较小，在低浓度药物作用下(<50μM)可以促进细胞生长，增加细胞活力。其CC50大于200μM。
图二 对细胞的毒性
对猫冠状病毒活性TCID50的测定
试验方法
1)将CCL-94细胞进行消化传代，用细胞生长液调整细胞密度为1×105/mL，接种12孔板2mL/孔，37℃、5％CO2培养箱培养16h；
2)取出12孔板，做好标记，将细胞维持液与盐酸考尼伐坦混合，使盐酸考尼伐坦终浓度分别为25μM、12 .5μM、6 .25μM、3 .125μM、1 .5625μM，振荡器上混匀至少5s；
3)弃去12孔板孔中培养基，用无菌PBS清洗三次，甩干后加入已经稀释好的药物，置于37℃、5％CO2培养箱孵育1h；
4)1h后，取出12孔板，每孔接种0 .01MOI的猫冠状病毒，轻晃12孔板混匀，每块12孔板设置病毒对照与细胞对照，于37℃、5％CO2培养箱培养；
5)约12h后，病毒对照出现70％病变，将12孔板转移至-80℃超低温冰箱冻融一次； [0028] 6)收集每孔液体至EP管中，4000rpm离心10min后收集上清测毒价。
试验结果
结果见图三和图四。从图三可以看出，镜下可以观察到正常的CCL-94细胞的细胞生长状态良好，细胞形态完整，细胞界限清晰，而用病毒感染的CCL-94细胞细胞变圆脱落，产生大量细胞碎片，无正常细胞形态，病变细胞聚集成团，病变非常明显，用盐酸考尼伐坦和病毒同时处理细胞后，细胞界限清晰，细胞生长良好，仅有极少量细胞发生病变。
图三 抑制病毒效果
从图四可以看出，盐酸考尼伐坦在25μM、12 .5μM、6 .25μM、3 .125μM、1 .5625μM、0μM时的TCID50分别为10-4 .50/mL、10-4 .63/mL、10-5 .40/mL、10-6 .62/mL、10-6 .74/mL、10-7 .00/mL。其中药物浓度在25μM时可以使毒价下降2 .5个滴度，12 .5μM时可以下降2 .37个滴度，6 .25μM时降低 1 .6个滴度。表明盐酸考尼伐坦对猫冠状病毒具有很好的抑制作用[1]。
图四 对猫冠状病毒的抑制作用
参考文献
[1]华中农业大学.盐酸考尼伐坦在制备治疗猫传染性腹膜炎药物中的用途:201811307771.X[P].2020-08-18.