甲基泼尼松龙琥珀酸钠是甲基泼尼松龙琥珀酸钠针的原料药,临床上主要用于抗炎、免疫抑制、休克和内分泌失调的治疗。易发生配伍禁忌,多见过敏反应。在2015年版《中国药典》中未见收载,本研究中按照《中国药典》和人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)方法验证的相关规定,建立了测定甲基泼尼松龙琥珀酸钠含量的高效液相色谱(HPLC)法,并进行了方法学验证。
测定方法
1、色谱条件及系统适用性试验
色谱柱:Thermo C18柱(250mm x4.0mm,5um);流动相:乙腈-3%冰醋酸(29:71);检测波长:254nm;柱温:25℃;流速:1.0mL/min;进样量:20uL。
各称取甲基泼尼松龙琥珀酸钠对照品和甲基氢化可的松琥珀酸单酯工作标准品适量,加流动相溶解并定量稀释成每1mL分别约含甲基泼尼松龙琥珀酸钠对照品和甲基氢化可的松琥珀酸单酯0.02mg的溶液。取20uL注入液相色谱仪,测定,记录色谱图。甲基泼尼松龙琥珀酸钠峰和甲基氢化可的松琥珀酸单酯峰的分离度为2.5,符合要求。
2、溶液制备
供试品溶液:精密称取甲基泼尼松龙琥珀酸钠适量,加流动相溶解,并定量稀释成每1mL约含0.1mg的溶液,即得。
对照品溶液:精密称取甲基泼尼龙琥珀酸钠对照品适量,加流动相溶解,并定量稀释成每1mL约含0.1mg的溶液,即得。
3、方法学考察
3.1、专属性试验
分别取空白溶液(流动相溶液)和供试品溶液各20μL,分别注入液相色谱仪,空白溶液色谱图中无干扰供试品溶液测试的溶剂峰。向供试品溶液中加入甲基泼尼松龙后进样,记录色谱图，加入的甲基泼尼松龙不干扰供试品溶液测试。
3.2、精密度试验
依法制备甲基泼尼松龙琥珀酸钠对照品溶液(约0.1g/L)1份,取20μL注入液相色谱仪,重复进样5次,测定。结果的RSD为0.16%(n=5),表明仪器精密度良好。
3.3、稳定性试验
取甲基泼尼松龙琥珀酸钠供试品溶液(约0.1g/L),常温放置,于0,4,8,12h时分别进样20μL,测定甲基泼尼松龙琥珀酸钠峰面积。结果峰面积平均值为2999812,RSD为0.65%(n=4),表明供试品溶液在12h内基本稳定。
3.4、重复性试验
取样品(批号为20A20150102)适量，依法平行制备甲基泼尼松龙琥珀酸钠供试品溶液(约0.1g/L)6份,对照品溶液(约0.1g/L)1份,分别进样20μL,按外标法以峰面积计算含量。结果甲基泼尼松龙琥珀酸钠含量平均值为98.37%,RSD为0.16%(n=6),表明方法重复性良好。
3.5、线性关系考察
精密称取甲基泼尼松龙琥珀酸钠对照品适量,用流动相制成质量浓度约0.5g/L的贮备液,分别精密量取贮备液4.0,4.5,5.0,5.5,6.0mL置25mL容量瓶中,加流动相稀释至刻度,即得每1mL含甲基泼尼松龙琥珀酸钠0.08,0.09,0.10,0.11,0.12mg的溶液,精密量取20μL,注人液相色谱仪,记录色谱图。以质量浓度(х)横坐标、峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归,得回归方程Y=30145893X-22250,r=0.9995(n=5)。结果表明,甲基泼尼松龙琥珀酸钠质量浓度在0.08~0.12g/L范围内与峰面积线性关系良好[1]。
参考文献
[1]乔晓芳. 高效液相色谱法测定甲基泼尼松龙琥珀酸钠含量[J]. 中国药业,2017,26(5):29-31. DOI:10.3969/j.issn.1006-4931.2017.05.007.