介绍
Boc-Arg(Pbf)-OH即Nα-叔丁氧羰基-NG-2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰-L-精氨酸，分子式为 C₂₄H₃₇N₅O₇S，是将精氨酸的 α-氨基以Boc、侧链胍基以Pbf双重保护的常用Fmoc固相多肽合成（SPPS）中间体。它主要作为液相/固相缩合单元参与多肽合成，在酸性条件下脱保护，可用于制备布舍瑞林等九肽药物，兼具反应活性高与保护选择性好的特点。
图一 Boc-Arg(Pbf)-OH
合成布舍瑞林的应用
1.全保护七肽Pyr-His(Trt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-OH的合成
称取50.0g2-CTC Resin(1.0mmol/g)于固相多肽合成反应器中，加入DCM溶涨30min，抽掉。称取17.7gFmoc-Leu-OH并加入约200mLDMF溶解同时冰水浴降温，加入8.7mLDIPEA活化10min后将氨基酸活化液加入到反应柱中反应，5min后再向反应器中加入17.5mLDIPEA继续反应约2h。反应结束后，依次加入DMF，MTBE,DMF交替洗涤2遍，将预先配制好的封闭液DCM/MeOH/DIPEA＝17/2/1(V/V/V)倒入树脂中封闭未反应的功能基团，封闭两次，每次10min。封闭结束后，加入DMF洗涤，并用MTBE收缩树脂，转移至真空干燥箱干燥至恒重，取树脂测得取代度为0.52mmol/g。
称取57.7g(30mmol)Fmoc-Leu-CTC Resin于多肽合成反应器中，加入DCM溶涨30min,抽掉。加入适量5％PIP/1.25％DBU/1％HOBt/DMF溶液脱保护两次，分别为10min,20min。加入DMF,MTBE,DMF交替洗涤2轮。称取17.3gFmoc-D-Ser(tBu)-OH,6.1gHOBt于烧杯中，加入DMF溶解，再加入7.9mLDIPEA在冰水浴条件下降温至0-5℃，最后加入17.1gHBTU活化约10min，将活化液倒入反应器中反应，以茚三酮检测判定缩合是否完全。反应结束后，按照脱保护、洗涤、缩合循环进入下一步氨基酸的缩合,缩合的保护氨基酸依次为：Fmoc-Tyr(Bzl)-OH,Fmoc-Ser(Trt)-OH,Fmoc-Trp-OH,Fmoc-His(Trt)-OH,Pyr。
将上述所得82.1g片段(1-7)肽树脂加入到82mL1％TFA/DCM(V/V)溶液中搅拌10min,将滤液抽至含适量吡啶的抽滤瓶中，重复三次，合并滤液并浓缩，将滤液加入到适量纯水中，有白色固体析出，滤除固体并真空干燥至恒重，得固体30.8g,测得ESI-MS：[M+H] + ＝1534.40；
2.二肽H-Arg-Pro-NHEt.2HCl的合成
称取8.9gPro-NHEt.HCl于烧瓶中并加入适量DMF搅拌至溶解，用DIPEA调pH至中性。称取29.0gBoc-Arg(Pbf)-OH,7.4gHOBt于烧杯中，加入DMF搅拌至溶解，随后加入19.2mLDIPEA并用冰水浴降温至0-5℃，再加入20.9gHBTU活化约10min,将活化液加入到溶有Pro-NHEt.HCl的烧瓶中，室温反应约4h，可通过TLC或者HPLC监控反应进程。反应结束后，加入适量EA并搅拌均匀，随后依次加入5％H 3 PO 4 溶液,饱和NaHCO 3 溶液，饱和NaCl溶液，纯水并分别洗涤2-3遍，收集有机相并用无水Na 2 SO4干燥约2小时，过滤并将滤液真空浓缩，用PE重结晶，过滤并真空干燥得到28.7g白色固体，测得ESI-MS：[M+H] + ＝651.30。
将所得28.7gBoc-Arg(Pbf)-Pro-NHEt加入到280mL4NHCl/EA溶液中，室温搅拌过夜，可用HPLC监控反应进程，反应结束后，将析出的固体过滤，并用EA洗涤固体5-6遍，将固体放置真空干燥器中干燥至恒重，称量所得固体为16.9g,测得ESI-MS：[M+H] + ＝373.10。
3.7+2片段缩合
称取11.6g二肽H-Arg-Pro-NHEt.2HCl溶于50mLDMF中并搅拌至溶解，加入DIPEA调pH至7。称取30.0g七肽全保护肽，5.1gCl-HOBt于烧杯中并用150mLDMF溶解，加入8.7mLDIPEA并用冰水浴降温至0-5℃，再加入9.5gHBTU活化约10min,将其加入到二肽溶液中，室温反应3-4h,并控制反应pH值在7，可用HPLC监控反应进程。反应结束后，将反应液加入到1.6L预先降温的冰水中，析出白色固体并过滤，用纯水洗涤固体3-4遍，将所得固体真空干燥至恒重，称量所得固体为40.8g，测得ESI-MS：[M+H] + ＝1815.34。
4.脱除侧链保护得到布舍瑞林粗品
将上述所得40.8g全保护九肽Pyr-His(Trt)-Trp-Ser(Trt)-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Pro-NHEt溶于410mL88％AcOH/H2O溶液中，搅拌至全溶并控制溶液温度在42℃。加入6.1g10％Pd/C于九肽溶液中，并用N 2 置换烧瓶中的空气，再通入H 2 置换2-3次，最后通入H 2 并维持约22h，可借助HPLC监控反应进程。反应结束后，将溶液过滤，将所得滤液加入到3.2L冰冻MTBE中，析出固体并过滤，用MTBE洗涤固体3-4遍，将固体转移至真空干燥器中干燥至恒重，称量所得固体重为24.4g,测得ESI-MS：[M+H] + ＝1239.75,粗品HPLC纯度为93.8％，收率为78.7％[1]。
图二 布舍瑞林粗品HPLC图
参考文献
[1]上海昂博生物技术有限公司. 一种布舍瑞林的制备方法:CN201410269996.6[P]. 2014-08-27.