3-三氟甲基-4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯胺

随着酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）的研发应用，慢性髓细胞白血病（CML）和城染色体阳性急性淋巴细胞白血病（Ph+ALL）患者的临床结局较前明显改善。甲磺酸伊马替尼是全球首个批准上市的第一代TKIs，能特异性阻断腺苷三磷酸（ATP）在ABL激酶上的结合位置，使酪氨酸残基不能磷酸化，从而抑BCR-ABL蛋白活性，导致BCR-ABL阳性细胞增殖受抑、凋亡增加。这种针对发病机制的分子靶向治疗使CML和Ph+ALL患者的预后发生了巨大改变。然而，接近35%的CML患者接受伊马替尼治疗并未获得完全细胞遗传学缓解（CCyR），可能是这部分患者复发的主要原因。第二代TKIs（如达沙替尼和尼洛替尼）可改善伊马替尼治疗失败患者的疗效，延长总生存期。目前，达沙替尼、尼洛替尼都已被批准作为CML慢性期患者的一线治疗方案。普纳替尼(普拉替尼)是一种口服多靶点TKIs合成物，为pan-BCR-ABL抑制剂。其体外抑制ABL与T315I突变ABL酪氨酸激酶活性的半抑制浓度（IC50）分别为0.4、2.0nmol•L-1，IC50值在0.1～20nmol•L-1，亦抑制其他致癌激酶的活性，包括血管内皮生长因子受体（VEGFR）、血小板衍生生长因子受体（PDGFR）、纤维母细胞生长因子受体（FGFR）、生促红素人肝细胞（Eph）受体、胞质酪氨酸激酶Src家族（SFK）、酪氨酸激酶膜受体基因（C-kit）、孤儿受体酪氨酸激酶（RET）、促血管生成素Ⅰ型酪氨酸激酶受体2（TIE2）和FMS样的酪氨酸激酶3（FLT3）。普纳替尼(普拉替尼)的分子结构是根据与T315I相互作 用的不同方式设计，与现有激酶抑制剂结构无关。ABL抑制剂包括含天冬氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸（DFG-in，1类抑制剂）和不含天冬氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸（DFG-out，2类抑制剂）两种类型，这取决于它们与BCR-ABL相互作用的结合方式。1类抑制剂为第一代小分子激酶抑制剂，靶向作用于酶活化基团的ATP结合位点，以活化环的构型开放为特征；2类抑制剂与其他疏水位点结合，与1类抑制剂不同，形成构型失活。相比之下，2类抑制剂较1类有更高的选择性和疗效。1类抑制剂包括舒尼替尼、达沙替尼，2类抑制剂包括伊马替尼、尼洛替尼和普纳替尼(普拉替尼)。不论结合方式，伊马替尼、达沙替尼和尼洛替尼都会与野生型ABL的门控基因残基Thr315侧链形成一个关键氢键，亦含部分亲脂性，与位于Thr315附近的疏水袋结合。但这种氢键易受破坏，且门控基因残基突变成异亮氨酸亦引起空间位阻，限制抑制剂结合临近的Thr315疏水袋。因此，伊马替尼、达沙替尼和尼洛替尼不能抑制Thr315点突变的ABL激酶活性。临床上观察到15%~20%的患者出现T315I突变，这种高度耐药变异发生在BCR-ABL融合蛋白ABL激酶ATP结合位点的门控基因区。值得注意的是，普纳替尼(普拉替尼)能避开与野生型BCRABLT315I的侧链结合，形成有利于结合T315I突变侧链异亮氨酸的范德华引力。此外，普纳替尼(普拉替尼)亦能调节异亮氨酸突变体的空间位阻，与T315I点突变结合抑制ABL激酶活性。

1）3-溴代咪唑并［1，2-b］哒嗪(3)的制备

将200g(1.68mol)咪唑并［1，2-b］哒嗪(2)溶于2L氯仿中，加328.8g(1.85mol)N-溴代丁二酰亚胺，加热回流(61℃)过夜，TLC显示反应完全。有机相用水洗涤(1L×2)，饱和氯化钠溶液洗涤(1L×1)，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得321g浅黄色固体3，收率96.7%，mp145～147℃(文献：mp146～147℃)。MSm/z：197.9［M+H］+。

2）4-甲基-3-三甲基硅基乙炔基苯甲酸甲酯(5)的制备

在5L三颈瓶中依次加入3-碘-4-甲基苯甲酸甲酯(4)300g(1.09mol)、碘化亚2.06g (11mmol)、二(三苯基膦)二氯化钯7.63g(11mmol)、乙酸乙酯4L、三乙胺329.3g(3.25mol)、三甲基硅乙炔159.8g(1.63mol)，通入氩气置换体系中的气体，封闭反应体系，室温搅拌过夜，TLC检测反应完全。过滤反应液，滤液用水(1L×2)、饱和氯化钠溶液洗涤(1L×1)，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得267.4g红色固体5，收率99%，无需纯化直接用于下步反应。

3）3-乙炔基-4-甲基苯甲酸甲酯(6)的制备

在5L三颈瓶中，加入267.4g(1.09mol)化合物5，再加入4L甲醇，机械搅拌使其溶解，加入225g(1.63mol)碳酸钾，室温机械搅拌的同时TLC监控反应(每1min1次)进程，约5～10min反应完毕。将反应液倾入5L水中，搅拌均匀，过滤沉淀，用3L水洗涤一次，固体真空干燥，得到180g棕色固体6，收率95%，mp62～64℃。

4）3-(咪唑［1，2-b］哒嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酸甲酯(7)的制备

在5L三颈瓶中加入180g(1.03mol)化合物6、198g(1.01mol)化合物3、1.9g(10mmol)碘化亚铜、7g(10mmol)二(三苯基膦)二氯化钯、3LN-甲基吡咯烷酮(NMP)、193.4g(1.50mol)二异丙基乙基胺(DIEA)，通入氩气置换体系中的气体，70℃下机械搅拌过夜，TLC检测反应完全。将反应液倾入12L水中，搅拌均匀，过滤，所得固体干燥后加入1L乙酸乙酯，搅拌1h。过滤，用乙酸乙酯洗涤(200mL×2)滤饼，真空干燥得到灰褐色固体283g；用4L乙酸乙酯溶解该固体，加入38g活性炭，加热回流1h，趁热过滤，滤液静置析晶，得185g浅黄色晶体7，收率63.6%，mp141～143℃。

5）普纳替尼(普拉替尼)(1)的合成

在2L三颈瓶中，加入50g(0.18mol)4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-三氟甲基苯胺(8)、53.3g(0.18mol)化合物7、500mL四氢呋喃，机械搅拌，冷却至0℃，在机械搅拌条件下缓慢滴加到由123g(1.10mol)叔丁醇钾溶于500mL无水THF的溶液中，滴加完毕后维持低温10min，移至室温，搅拌过夜，TLC检测反应完全。将反应液倾入3L水中，搅拌均匀，乙酸乙酯(1L×3)萃取，合并有机相，用水(1L×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，得黄色固体，加入100mL乙酸乙酯溶解该固体，搅拌2h。过滤，干燥，用1，4-二氧六环-水(体积比1∶1)重结晶，得到浅黄色固体普纳替尼(普拉替尼)(1)73g，收率71.9%，mp195～197℃。MSm/z：533.3［M+H］+。HPLC(面积归一化法)检测纯度为99.65%。