背景及概述[1]
灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganodermalucidum(LeyssexFr.)Karst.或紫芝GanodermasinenseZhao，XuetZhang的干燥子实体，是我国传统中药，具有补气安神，止咳平喘之功效，已有上千年的药用历史。灵芝孢子是灵芝的种子，其内壁含有淡黄色到淡黄褐色的油滴，而灵芝孢子油是从灵芝孢子中萃取的油脂类物质，集中了灵芝孢子中诸多有效成分，如三萜类灵芝酸、不饱和脂肪酸和微量元素等，研究表明具有抗肿瘤、免疫调节作用、保肝护肝等作用，被广泛应用于医药行业。灵芝孢子油中含有三萜类成分灵芝酸C1，有研究建立了芝孢子油中灵芝酸C1含量测定方法，并测定不同来源的灵芝孢子油中灵芝酸C1的含量，以期为灵芝孢子油质量控制提供参考。
含量测定[1]
1.色谱条件
色谱柱：AgilentZorbax-SBC8(150mm×4.6mm，3.5μm)；流动相：乙腈-0.1%醋酸水溶液(25︰75)；检测波长为256nm；柱温为22℃；流速为1.0mL·min-1；进样量：20µL。
2.溶液的制备
2.1对照品溶液的制备
取减压干燥至恒重的灵芝酸C1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含12μg灵芝酸C1的对照品溶液。
2.2供试品溶液的制备取灵芝孢子油1g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇5mL，密塞，称重，超声25min，静置冷却，称重，加甲醇补足失重，摇匀，放入冰箱冰冻，待孢子油凝固于锥形瓶底层时，吸取上清液，放至
室温，滤过。
2.3测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20µL，注入液相色谱仪测定，即得。对照品溶液和供试品溶液色谱图见图1。
制备[2]
1）大孔树脂分离：将灵芝醇提物用40%乙醇溶解，过滤后上大孔树脂HZ-816柱分离，水、30%、50%、70%、90%乙醇依次进行梯度洗脱，每1/6柱体积收集为一个馏分，馏分由液相分析检测其成分，合并其中主要含有灵芝酸C1和灵芝酸F的馏分，浓缩得到以灵芝酸C1和灵芝酸F为主的混合物，高效液相色谱仪分析检测其纯度为39.5%。
2）高速逆流分离：采用TBE-300B半制备型高速逆流色谱仪。按溶剂体系石油醚：乙酸乙酯：甲醇：水=5：5：3.5：6.5配制成溶液于分液漏斗中，充分摇匀后静置分层，分取上、下层溶液并超声脱气；以上相为固定相，下相为流动相，固定相先以15mL/min泵入主机，待主机充满固定相（主机管路流出口有固定相流出）之后，以3mL/min泵入流动相，同时开启主机转速900转/分；待整个体系建立动态平衡（主机管路流出口开始有流动相流出）后，将200mg由步骤1.1制得的灵芝酸C1和灵芝酸F的混合物溶解在20mL流动相中，由进样阀进样，自动部分馏分收集器收集分离液，每8mL收集为一个馏分，HPLC分析检测分离情况，分别收集合并灵芝酸C1和灵芝酸F的馏分，浓缩并干燥得纯度90.6%的灵芝酸C1和纯度91.4%灵芝酸F。灵芝酸C1和灵芝酸F出峰时间分别为108min和137min，分离效果较好。
主要参考资料
[1]蒋婷婷,卢端萍,黄旭慧.HPLC测定灵芝孢子油中灵芝酸C_1的含量[J].中国现代应用药学,2017,34(05):726-728.
[2]CN201310712528.7一种分离制备抗肿瘤成分灵芝酸C1和灵芝酸F的方法