背景及概述[1]
7-[（3R）-3-氨基-1-氧-4-（2,4,5-三氟苯基）丁基]-5,6,7,8-四氢-3-（三 氟甲基）-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡嗪，又称为西他列汀，是由美国默克公司研发的一种新型抗Ⅱ型糖尿病药物，2006年10 月被美国FDA批准上市，是个用于治疗Ⅱ型糖尿病的二肽基肽酶-Ⅳ （DPP-Ⅳ）抑制剂类药物，常以磷酸盐形式入药。西他列汀能提高血浆中 的GLP-1、GIP的活性，轻度增加其含量并能减弱GLP-1代谢物的拮抗作 用，同时，西他列汀刺激胰岛素分泌具有血糖依赖性，故能大大降低传统 口服降糖药低血糖副作用的发生率。
氘标方法[2]
化合物Ⅰ的制备：
取水合肼(85%，1.33克)溶于四氢呋喃(50毫升)中，将三氟乙酸乙酯(5克，98%)滴 加进去，滴加时温度保持低于25℃，继续搅拌两小时，再滴加氢氧化钠水溶液(50%，1.4毫 升)，反应液变为灰色。10分钟后，再将氯乙酰氯(3.97克)滴加进去，滴加时保持低于20℃。 滴加结束后，待反应混合物恢复室温后继续搅拌1.5小时，反应完全后，用四氢呋喃带水，抽 滤除去白色固体(氯化钠)，滤液旋干得到化合物Ⅰ（双酰肼）7.0克，收率97.25%。HPLC纯度 95.4%。
化合物Ⅱ的制备：
取化合物Ⅰ(3.0克)溶于干燥乙腈中(6毫升)，冰浴冷却，将三氯氧磷(2.25克，1摩 尔当量)慢慢滴加进去，反应加热至100℃搅拌过夜。冷却，然后将碳酸氢钠水溶液(5%，50毫 升)慢慢加进去，得到的悬浮液用乙酸乙酯萃取三遍，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干 得到化合物II(2.4克)，收率87.73%HPLC纯度95.5%。
化合物Ⅲ的制备:
取乙二胺-D4(3.0克)溶于甲醇(21.8毫升)中，液氮冷却至-20℃，加入化合物II (氧二氮杂茂，4.36克)，维持温度在-10℃，反应2小时。澄清的溶液变为悬浮液。加入乙醇 (30毫升)，继续搅拌30分钟，温度慢慢恢复至-5℃，待大量固体析出，抽滤，固体用乙醇洗涤 两次，得到化合物Ⅲ(3.98克)，收率80.44%，HPLC纯度98.8%。化合物Ⅲ1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ3.599(s,2H).MS:215.0[M+H]+。
化合物Ⅳ盐酸盐的制备:
取化合物III(3.53克)悬浮在甲醇(14毫升)中，加热至55℃，然后滴加浓盐酸(1.5 毫升)，继续加热30分钟。反应液冷却至室温，加入异丙醚(30毫升)，冰浴冷却，大量固体析 出，抽滤干燥得化合物IV(3.1克)，收率80.77%，HPLC纯度99.2%。
化合物V的制备:
取2,4,5-三氟苯乙酸(1.64克)、丙二酸环亚异丙内酯(1.37克)和DMAP(80毫克)溶 于DMAc(5.87毫升)中。慢慢加入N,N-二异丙基乙胺(2.23克)，冰浴冷却，再将特戊酰氯 (1.14克)慢慢滴加到反应液中，冰浴搅拌1小时，待反应液变为黄色悬浊液，反应加热至45 ℃搅拌30分钟得到化合物V的DMAc溶液，未经分离直接投下一步反应。
化合物Ⅵ的制备:
取化合物IV盐酸盐(2.01克)，加入新制得的化合物V的DMAc溶液中，反应升温至80 ℃搅拌2小时。冷却至室温，再加入饱和碳酸氢钠水溶液(50毫升)，然后用乙酸乙酯萃取4 遍。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得到粗产物(化合物VI，5.1克)。化合物VI通过柱 色谱纯化得到3.02克纯的化合物VI，白色固体，收率82.72%。HPLC纯度98.5%。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.05(m,1H),6.92(m,1H),5.2～4.8(m,2H),4.3～3.8(m, 4H),3.58(brs,1H),3.48(s,2H)。
化合物Ⅶ的制备:
取化合物VI(2.0克)溶于甲醇(2.8毫升)中，加入乙酸铵(1.09克)和浓氨水(1毫 升)，控制温度在30℃以下。然后将反应升温至65℃搅拌40分钟，待大量固体析出，冷却，抽 滤，干燥得化合物Ⅶ1.77克，得白色固体，收率88.71%，HPLC纯度97.2%。
化合物Ⅷ盐酸盐的制备:
取化合物Ⅶ(1.76克)溶于甲醇(17毫升)中，加入氰基硼氢化钠(0.32克)，反应液 用甲醇盐酸调节pH至4～5，在室温搅拌反应30分钟，然后旋干甲醇，加入饱和碳酸氢钠水溶 液(10毫升)，用乙酸乙酯萃取4遍，合并有机相，并用无水硫酸钠干燥，旋干得粗产物1.7克， 粗产物经柱色谱纯化得1.59克，HPLC显示纯℃>99%，产物是油状液体。用甲醇氯化氢成盐酸 盐得化合物Ⅷ盐酸盐1.48克(西他列汀-D4)，收率83.66%。HPLC纯度99.2%。化合物Ⅷ的1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.18(brs,3H),9.04(s,1H),7.64(m,2H), 5.04～4.97(m,2H),3.82(br,1H),3.2～2.8(m,5H).MS:412.1[M+H]+。并检测同位素丰度为 99.8%。
参考文献
[1] [中国发明,中国发明授权] CN201410047793.2 一种西他列汀及其盐的合成方法
[2] [中国发明,中国发明授权] CN201410162232.7 一种氘标记西他列汀的制备方法