丙二醛（Malonic dialdehyde, MDA）是膜脂过氧化最重要的产物之一，它的产生还能加剧膜的损伤，因此在植物衰老生理和抗性生理研究中，丙二醛含量是一个常用指标，可通过MDA了解膜脂过氧化的程度，从而间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
1、意义
在植物衰老生理和抗性生理研究中MDA含量是一个常用指标。植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛(MDA)是膜脂过氧化的最终分解产物，其含量可以反映植物遭受逆境伤害的程度。MDA从膜上产生的位置释放出后，可以与蛋白质、核酸反应，从而使之丧失功能，还可使纤维素分子间的桥键松驰，或抑制蛋白质的合成。因此，MDA的积累可能对膜和细胞造成一定的伤害。可通过MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。其含量高低可以作为考察细胞受到胁迫严重程度的指标之一,它的主要伤害是导致膜脂过氧化,损伤生物膜结构,主要是细胞质膜,使得细胞膜结构和功能上受到损伤,改变膜的通透性,从而影响一系列生理生化反应的正常进行。
2、测定原理
植物器官衰老时，或在逆境条件下，往往发生膜脂过氧化作用,丙二醛( malondialdehyde , MDA)是其产物之一,通常利用它作为脂质过氧化指标，表示细胞膜脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强弱。MDA在高温、酸性条件下与硫代巴比妥酸(TBA)反应，形成在532nm波长处有光吸收的有色三甲基复合物，该复合物的吸光系数为155[mmol/(L•cm)],并且在600 nm波长处有最小光吸收。可按公式
A532-A600=155000* C * L
算出MDA浓度C(μmol/L),进一步算出单位重量鲜组织中MDA含量C(μmol/g)。式中A532和A600分别表示532 nm和600 nm波长处的吸光度值。L为比色杯厚度(cm)。
另外，植物组织中糖类物质对MDA-TBA反应有干扰作用。为消除这种干扰，经试验:可用下列公式消除由蔗糖引起的误差。
C/μmol/L=6.45(A532-A600)-0.56A450
式中A450、A532、A600分别代表450 nm、532 nm和600 nm波长下的吸光度值。用公式可直接求得植物样品提取液中MDA的浓度,进一步算出其在植物组织中的含量。
3、测定方法步骤
需要的试剂: 5% 三氯乙酸 (TAC)、0. 67% 硫代巴比妥酸 (TBA)。
(1) 取少量植物组织 (叶片)，质量记为 m，加入 5% TAC 5 ml，研磨后所得匀浆在 3000 r/min下离心 10 min。(2) 用移液枪慢慢吸取上清液 2 ml，不要过快，以免吸入植物体，加入 0. 67% TBA 2 ml，混合后在 100℃水浴环境下煮沸 15 min，冷却后再离心一次 (10 min)。(3) 分别测定上清液在 450 nm、532 nm 和600 nm 处 的 吸 光 度 值，以 2 ml 蒸 馏 水 加 2 ml0. 67% TBA 为对照。按如下公式计算:C/μmol/L=6.45(A532-A600)-0.56A450式 中 A450， A532， A600 分 别 代 表 450nm、532nm、600nm 波长下的吸光度值，C 是丙二醛的浓度 (μmol/L)。再进一步算出其在植物组织中的含量:
W = CV/m式中 W 是丙二醛含量 (μmol/g)，V 是提取液总体积 (L) ，m 是植物组织鲜重(g)。