4-(4-硝基苯基)丁酸（4-(4-Nitrophenyl) butyric acid，NPBA）的分子式为C10H11NO4。其分子结构由苯环、硝基和丁酸链组成。纯品为黄色结晶粉末，微溶于水，易溶于甲醇、乙醇等极性有机溶剂。硝基的吸电子效应使其酸性强于4-苯基丁酸（4-PBA），pKa约为3.8，在中性条件下以阴离子形式存在，易与金属离子形成盐类化合物。
4-(4-硝基苯基)丁酸
作为LC-HRMS内标的应用
在4-苯基丁酸（4-PBA）的定量分析中，NPBA因与4-PBA结构相似（仅苯环4位多一个硝基），成为理想的内标物（IS），质谱响应匹配：NPBA与4-PBA的质荷比（m/z）差异显著（NPBA为208.06 [M-H]⁻，4-PBA为163.08 [M-H]⁻），可通过选择离子监测（SIM）模式同时检测，减少基质干扰。在NBA和DMEM中，添加 NPBA 后，4-PBA的定量下限（LLOQ）达0.38 µM，日内和日间相对标准偏差（RSD）均 < 15%，回收率在 92.5%–114.2% 之间，证明内标法可显著提升分析精度。样品制备时，将 NPBA（0.02 µM）与甲醇按 1:3 比例加入培养基，经蛋白沉淀、离心和溶剂蒸发后，通过 LC-HRMS 检测，其稳定的响应值可校正基质效应和进样误差。
在阿尔茨海默病模型中，NPBA辅助的LC-HRMS方法可定量检测 NBA培养基中4-PBA的浓度。3Tg-iAstro细胞经4-PBA处理48 h后，培养基中残留的 4-PBA 浓度为0.38 ± 0.02 µM，该浓度可部分恢复野生型星形胶质细胞的蛋白质合成，但对3Tg-AD 细胞无效。在黑色素瘤细胞（CHL-1 和 A375）中，NPBA内标法显示5 µM 4-PBA可抑制毒胡萝卜素（TG）诱导的内质网应激（ER stress），且细胞对4-PBA的吸收不受TG浓度影响，胞内浓度达1.00 µM时即可发挥作用[1]。
合成
经典路线为4-硝基苯乙酸与溴丁酸在碱性条件下发生亲核取代反应，或通过硝基苯与丁二酸酐经傅克酰基化制备4-(4-硝基苯基)丁酸，反应需在无水溶剂（如 DMF）中进行，产物经重结晶纯化。
参考文献
[1]Salvatore V ,Giulia D ,Laura T , et al.Quantification of the Chemical Chaperone 4-Phenylbutyric Acid (4-PBA) in Cell Culture Media via LC-HRMS: Applications in Fields of Neurodegeneration and Cancer[J].Pharmaceuticals,2023,16(2):298-298.