3-氨基-4-氯苯甲酸是染料及医药生产的重要中间体，有关其合成方法，一般是由对氯苯甲酸硝化制得3-硝基-4-氯苯甲酸，再还原3-硝基-4-氯苯甲酸而得3-氨基-4-氯苯甲酸。有关3-氨基-4-氯苯甲酸含量分析，目前尚未见报道，而与此相关的HPLC法对苯甲酸衍生物的分离分析，仅局限于硝基苯甲酸与氨基苯甲酸的分离分析，本文建立了以液相色谱法分析3-氨基-4-氯苯甲酸含量的方法，简便、易行、结果准确。
测定方法[1]
1、仪器与试剂
3-氨基-4-氯苯甲酸标准品(上海试剂一厂实验试剂，经自行重结晶,以液相色谱面积归一法定量含量大于99.5%。);甲醇(色谱纯);水(二次蒸馏水);磷酸(分析纯)。
日本岛津LC-6A高效液相色谱仪,SPD-6AV紫外可见检测器,HS2000色谱数据工作站。
2、色谱条件
色谱柱:Kromasil C8(250mmx4.6mm,10um);流动相:甲醇-0.05%(ψ)磷酸水溶液(体积比 65:35);流速:1.2mL/min;柱温:40°C;紫外检测波长:254nm。
3、对照品溶液的制备
精密称取3-氨基-4-氯苯甲酸对照品40mg,置于10mL的容量瓶中,甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密吸取此溶液0.2.0.4.0.6.0.8.1.0 mL分别置于10mL容量瓶中,加甲醇稀释定容。浓度为0.08.0.16.0.24.0.32.0.40g·L-1对照品溶液。
4、供试品溶液的制备
精密称取3-氨基-4-氯苯甲酸样品40mg,置于10mL的容量瓶中,甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀。精密吸取此溶液0.6mL置于10mL容量瓶中，加甲醇稀释定容。
结果与讨论
为了对3-氨基-4-氯苯甲酸进行快速准确的测定,该法对色谱柱,流动相,波长等条件进行了选择。由于3-氨基-4-氯苯甲酸在甲醇中均有较好的溶解度,故采用反相色谱,色谱柱选用常用的C8柱,流动相选用甲醇与水。由于3-氨基-4-氯苯甲酸其结构中含有羧基显一定的酸性,流动相选用甲醇与水,色谱峰明显拖尾,为改善峰形,在水中加入一定量的磷酸。实验中发现甲醇与酸性水溶液的比例,流动相中甲醇比例过高,所测物质保留时间过短,各物质之间达不到完全分离,随着甲醇含量的不断降低,保留时间越来越长,各物质之间分离也越来越完全。当甲醇占65%时,主峰、原料、中间体之间达到完全分离。检测波长选常用的254nm,因主峰及有可能含有的有机杂质其结构中均有苯环存在,故选此波长[1]。
参考文献
[1]张志兰,丁元晨,项苏留,等. HPLC法测定3-氨基-4-氯苯甲酸的含量[J]. 化学工程师,2004,18(4):28-29. DOI:10.3969/j.issn.1002-1124.2004.04.014.