O-叔丁基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-酪氨酸的制备及其应用

O-叔丁基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-酪氨酸是一种Fmoc保护的氨基酸衍生物，常用于多肽的合成。

制备方法^[1]

将N-苄氧羰基-（O-叔丁基）酪氨酸甲酯（2.34克，6.7毫摩尔）、碘甲烷（2.84克，20毫摩尔）以及氢化钠（在油中的分散体含量为80%，400毫克，13毫摩尔）在四氢呋喃（50毫升）中于0℃下混合，随后在室温下搅拌16小时。加入水（5毫升），搅拌2小时后，将水相酸化并用乙醚萃取。乙醚萃取液用饱和氯化钠溶液洗涤，干燥后蒸发，得到N-苄氧羰基-N-甲基-（O-叔丁基）酪氨酸（1.83克，产率78%）。 将该产物（1.63克，4.64毫摩尔）与5%的钯/碳（500毫克）在二氯甲烷（50毫升）中于氢气氛围下搅拌。13小时后，溶液通过硅藻土过滤并蒸发。残余物重新溶解于10%的碳酸钠溶液（50毫升）中并冷却至0℃。加入二氧六环（50毫升）以及溶于二氧六环（50毫升）中的芴甲氧羰基氯（Fmoc-Cl，1.15克），混合物在0℃下搅拌。用乙醚洗涤后，将水层酸化并用乙酸乙酯萃取。萃取液用盐水洗涤，干燥后蒸发，得到一种白色固体（1.35克，产率62%），该白色固体从乙酸乙酯中重结晶后得到O-叔丁基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-酪氨酸为白色针状晶体。

多肽合成应用^[2]

实施例2组装肽链N-甲基-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Met-Pro- Leu-Trp-NH-Bn。具体步骤如下：将1克2-氯三苯甲基树脂在10毫升二氯甲烷中溶胀10分钟，然后用干燥的DMF洗涤四次。随后，向树脂中加入溶于干燥DMF的2当量Fmoc-色氨酸（Boc保护）溶液和5当量的DIEA。树脂混合物在室温下搅拌1小时。从树脂床中排出反应溶液，并用DMF洗涤树脂两次。接着，向树脂中加入10毫升二氯甲烷/甲醇/DIEA混合液（体积比80:15:5），混合物在室温下振荡10分钟。从树脂中排出溶液，并用DMF洗涤树脂三次。向树脂中加入10毫升25%哌啶的DMF溶液，在室温下振荡20分钟，重复该过程一次。偶联下一个氨基酸前充分洗涤树脂：将3当量的Fmoc-亮氨酸用HOBt/DIC在DMF中活化，加入5当量的DIEA。偶联反应进行1至1.5小时，茚三酮试验呈阴性表明反应完成。之后，用10毫升25%哌啶的DMF溶液处理20分钟以去除Fmoc保护基。 随后依次偶联以下氨基酸残基，均使用3当量的Fmoc保护氨基酸：Fmoc-脯氨酸、Fmoc-甲硫氨酸、Fmoc-苯丙氨酸、Fmoc-甘氨酸、Fmoc-D-丙氨酸和O-叔丁基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-酪氨酸。 最后一个残基Fmoc-(N-甲基)-酪氨酸(叔丁基保护)偶联完成后，使用1%三氟乙酸的二氯甲烷溶液在室温下处理1小时，将完全保护的肽酸从树脂上裂解下来。重复裂解过程一次，通过旋转蒸发除去溶剂，将完全保护的粗肽酸冻干。 取500毫克冻干的粗肽酸，用HOBt/DIC/DIEA在约15毫升干燥DMF中活化，与100毫克3,5-双(三氟甲基)苄胺（分子量243.1Da，3当量）偶联。反应混合物在室温下磁力搅拌2小时。然后向反应混合物中加入5毫升哌啶，继续搅拌20分钟以去除Fmoc保护基。用冷乙醚沉淀出粗反应产物，然后冻干得到。

参考文献

[1]MARK G. HINDS, JOHN H. WELSH, DAVID M. BRENNAND, et al. Synthesis, conformational properties, and antibody recognition of peptides containing .beta.-turn mimetics based on .alpha.-alkylproline derivatives[J]. Journal of Medicinal Chemistry,1991,34(6):1777–1789. DOI:10.1021/jm00110a005.

[2]MAINLINE BIOSCIENCES (SHANGHAI) CO., LTD.. PEPTIDIC PAIN MODULATORS AND METHODS FOR PRODUCING AND USING THE SAME:IB2022055898W[P]. 2023-12-28.