简介
欧洲药典规定：布地奈德原料药中任何≥0.1%的单一杂质都必须被分离、鉴定并控制。天津药业商品化批次HPLC检测发现，有一未知杂质峰常年徘徊在0.12%–0.15%，超过阈值，遂被命名为“四烯孕二酮”(布地奈德杂质99)。该杂质极性略小于布地奈德，UV吸收行为与母体药物几乎一致，提示仍为甾体共轭骨架。毒性评估虽未见异常，但为满足注册与出口要求，必须弄清其结构并建立控制策略[1-2]。
四烯孕二酮的性状
分离纯化
布地奈德10g粗品先用90mm内径闪式柱（二氯甲烷-丙酮9∶1）做粗分，收集含杂质A富集段，得到30mg纯度约60%的油固混合物；再经Waters半制备HPLC（二氯甲烷-丙酮8∶2，254nm检测）反复进样，最终拿到8mg色谱纯度≥98%的白色固体四烯孕二酮，足够完成全套波谱实验和后续合成对照[1]。
多级波谱解析
（1）ESI-MS给出m/z446[M+H]+，比布地奈德高16u，提示可能多一个氧原子。（2）1H-NMR仍保留1-H（δ7.23）、2-H（δ6.27）、4-H（δ6.02）等泼尼松龙型A环共轭特征信号，说明1,4-二烯-3-酮骨架未变；但16-H由布地奈德的双峰组（22R/22S两套）变成单一dd峰（δ5.74），且22位缩醛质子消失。（3）13C-NMR出现δ171.9的新羰基碳，结合HMBC显示该羰基与16-H、23-CH2、24-CH2远程相关，推断16位接有丁酰氧基侧链。（4）通过COSY、HMQC、HMBC完成全部25个碳和27个氢的归属，最终确认杂质A为16α-丁酰氧基泼尼松龙[1]。
定向合成
①21-位选择性叔丁基二甲硅（TBDMS）保护：四羟基物+TBDMSCl/咪唑/DMF，室温1h，收率41%，得关键中间体5；②16-位丁酰化：中间体5溶于吡啶，滴加丁酰氯，90min后TLC显示原料点基本消失；③酸水解脱硅醚：95%乙醇-0.27molL⁻¹HCl，40min完成，乙醚提取；④闪式柱纯化（乙酸乙酯-石油醚1∶3）并重结晶，得45mg白色晶体四烯孕二酮,总收率23.4%，mp179–181°C。合成品与分离品在相同HPLC条件下保留时间完全一致（ΔtR<0.02min），1D/2DNMR叠谱无差异，从而确证杂质A结构无误[1-2]。
参考文献
[1]刘彦龙,蔡正贵,张健青,等. 布地奈德杂质16,17-脱氢-21-羟基泼尼松龙的合成 [J]. 精细化工中间体, 2025, 55 (01): 38-41. DOI:10.19342/j.cnki.issn.1009-9212.2025.01.008.
[2]晁建平,夏庆,任津岩,等. 布地奈德产品中杂质A的结构鉴定与合成 [J]. 中国药物化学杂志, 2006, (02): 74-78+61.