N,N-二乙基二叔丁基亚磷酰胺酯(DBPA)是生化制药的一种保护剂,在生化制药行业中,应用很广泛。N,N-二乙基亚磷酰胺二叔丁酯分子结构中含有烷氧基官能团,可以通过测定烷氧基官能团来测定N,N-二乙基亚磷酰胺二叔丁酯的含量。大多数的分析方法是采用与HI反应,裂介生成碘代烷烃,然后用气相色谱定量分析。由于样品没有紫外吸收,本文参考Ziesel烷氧基测定方法,采用HI与N,N-二乙基亚磷酰胺二叔丁酯反应,裂介生成叔丁基碘，然后用溶剂萃取进行紫外分析,进行了各种条件试验,结果令人满意。
检测方法[1]
1、分析原理
N,N-二乙基亚磷酰胺二叔丁酯与HI裂介反应生成叔丁基碘,用环已烷萃取,然后在最大吸收波长269.40nm处用紫外分光光度法进行定量测定。
2、测定步骤
准确称取0.5~0.6mmol N,N-二乙基亚磷酰胺二叔丁酯样品,置于50mL棕色比色管中,加入0.5mL丙酸酐,1.0mL 57%HI,1滴50%的次亚磷酸，环己烷25mL,充分振荡后,塞紧塞子,在沸水浴中加热1h。冷却,打开塞子,加入25mL环己烷，充分振荡后倒入分液漏斗,用蒸馏水少量多次洗涤比色管,洗液一同倒入分液漏斗，振荡后静置分层,放掉水层。加入20mL 1 mol/L的NaOH和6滴30%过氧化氢,振荡至环己烷呈无色透明,静置分层,放掉水层(重复2次)。有机层放入50mL容量瓶中,用环己烷定容到刻度线，然后，以环己烷为参比,用1cm石英吸收池,在波长为269.40nm处测定吸光度。
3、结果计算
式中:C为从标准曲线上所测吸光度对应的浓度,mmol/L;249.36为N,N-二乙基亚磷酰胺二叔丁酯的分子量,g/mol; W为样品的重量,g。
方法验证
1、标准曲线的绘制
准确称取N,N-二乙基亚磷酰胺二叔丁酯标准样品0.1245g置于50mL容量瓶中,用环己烷稀释至刻度。再从中分别吸取1.0、.2.0、3.0.4.0和5.0mL置于5个25mL容量瓶中。再用环己烷稀释至刻度。按上述测定步骤进行样品处理。在269.40nm处测定吸光度。以吸光度A对浓度C进行线性回归,得到回归方程:A=0.0645+0.63425C,r=0.9996,线性范围为0~0.498mg/mL。
2、精密度试验
选择标样,按照上述步骤进行5次重复测定,平均含量为99.30%,相对标准偏差为0.52%。
3、样品的测定
准确称取N,N-二乙基亚磷酰胺二叔丁酯样品,按上述测定步骤进行5次测定,测定结果见表。在已知含量的样品中,加入标准溶液,用上述方法进行回收率试验,回收率为98%~102%,结果令人满意[1]。
参考文献
[1] 杨始刚. 紫外分光光度法测定N,N-二乙基二叔丁基亚磷酰胺酯的含量[J]. 上海应用技术学院学报（自然科学版）,2004,4(4):287-289,293. DOI:10.3969/j.issn.1671-7333.2004.04.014.