前言
蔗糖酶(Sucrase,β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶,fructofuranoside fructohydrolase,EC 3.2.1.26),又称转化酶(Invertase),能特异地催化非还原糖中的a-呋喃果糖苷键水解,具有相对专一性。蔗糖酶从酵母中提取,蔗糖在蔗糖酶的作用下,能得到比蔗糖溶解度更高、不易有结晶析出的高浓度转化糖浆,还原力增加,甜度增加。
蔗糖酶主要应用于制备蔗糖转化糖浆，还可用于软糖和巧克力糖软芯中防止出现蔗糖结晶，另外蔗糖酶还可用于从棉籽糖制备蜜二糖和从菊粉中制备果糖，以及降低果汁中蔗糖含量等。
对酶进行固定化开辟了酶的许多新用途。蔗糖酶的固定化国内外研究相对较少。包埋法是酶固定化的一种常见方法,条件温和,操作简单,对酶活性影响小,有利于小分子量底物的进入和小分子量产物的扩散,适合固定化。本文利用包埋法就蔗糖酶的固定化及固定化酶的性质作了初步研究。
蔗糖酶的固定化
3.5mg蔗糖酶,0.4g氯化钙,0.5g明胶溶于10mL醋酸钙缓冲溶液(25mmol/L,pH4.4)中，充分溶解,并降温至59℃~10℃,通过6号注射器的针头将上述冷却液以5cm的高度滴入到100mL的1%(w/v)的海藻酸钠溶液(用NaOH调pH8)中,过滤约得到200个微球。微球在醋酸钙缓冲溶液(25mmol/L,pH4.4)中硬化30min后,将微球置入到20℃、1%戊二醛溶液中进一步硬化2h，用醋酸钙缓冲溶液(25mmol/L,pH4.4)洗涤后,固定化酶置于用醋酸钙缓冲溶液(25mmol/L,pH4.4)中,贮存在0℃~5℃冰箱中准备在实验中使用[1]。
蔗糖酶的活力测定
12mL酶液(稀释率1:300,w/v)与108mL蔗糖溶液(120g/L,pH5.5醋酸溶液)混合均匀,37℃反应10min。用DNS法测定反应液中还原糖的量。以煮沸酶液作对照，以1min内催化释放1umol还原糖的酶量为1个酶活单位(U)。固定化蔗糖酶酶活测定的反应体系同游离酶,取适量固定化酶与底物混合,均匀搅拌反应10min,离心后取上清液,用DNS法测反应液中还原糖的量[1]。
参考文献
[1] 陈雄,王金华. 固定化蔗糖酶的研究[J]. 中国酿造,2006(12):27-29. DOI:10.3969/j.issn.0254-5071.2006.12.008.