背景[1-5]
大鼠大隐静脉内皮细胞分离自大隐静脉；大隐静脉起于足背静脉弓内侧端，经内踝前方，沿小腿内侧缘伴隐神经上行，经股骨内侧髁后方，进入大腿内侧部，与股内侧皮神经伴行，逐渐向前上，在耻骨结节外下方穿隐静脉裂孔，汇入股静脉，其汇入点称为隐股点。有5条属支：旋髂浅静脉、腹壁浅静脉、外静脉、股内侧浅静脉和股外侧浅静脉，它们汇入大隐静脉的形式多样，相互间吻合丰富。大隐静脉曲张行高位结扎时，须分别结扎、切断各属支，以防复发。大隐静脉内皮细胞对维持大隐静脉动态平衡起着重要作用。它们合成、分泌凝血和纤溶系统的激活因子和抑制因子、影响血小板粘附和聚集的调节因子；大隐静脉内皮细胞还释放控制细胞增殖和调节血管壁紧张度的分子。大鼠大隐静脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×105cells/瓶；细胞经CD31/vWF免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
应用[6][7]
用于miR-126-3p对移植静脉桥血管再内皮化及内膜增生的临床和基础研究
冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病,coronary heart disease,CHD)是严重威胁人类健康、减低人类寿命的疾病之一,它是最常见的后天性心脏病。20世纪60年代出现的冠状动脉旁路移植术(冠脉搭桥,coronary artery bypass graft,CABG),是现今治疗冠心病最安全、有效的手术方法之一。目前CABG使用最普遍的静脉移植桥血管仍然是自体大隐静脉(human saphenous vein,HSV),采用冠状动脉狭窄远端-HSV-升主动脉吻合的方法是CABG的标准手术方式之一。相关研究表明,约有15%的移植HSV将在CABG术后1年内闭塞,而移植HSV 10年通畅率低于50%-60%。
自体HSV桥血管的高堵塞率成为限制CABG手术效果的严重障碍,如何降低HSV桥血管的堵塞发生率已经成为CABG术后一个亟待解决的问题。移植静脉再狭窄是一个复杂的病理生理过程,其基本病理改变是移植静脉桥血管内膜增生,主要病理生理机制是以移植静脉桥血管内膜内皮细胞(endothelial cell,EC)损伤为触发环节,导致内皮下炎症浸润,血管平滑肌(vein smooth muscle cell,SMC)过度增生、异常迁移导致内膜增生,细胞外基质(extracellular matrix,ECM)大量分泌沉积进一步致移植静脉内膜增厚、硬化和狭窄,最终导致移植静脉闭塞。
众多研究显示,通过促进损伤移植血管内皮细胞功能恢复,能够加速血管再内皮化,从而达到减轻移植静脉内膜增生、改善移植静脉远期通畅率、提高CABG的手术效果的目的。MicroRNAs(miRNAs,miRs)是一类短链非编码小RNA,它通过与mRNA碱基配对结合使其降解或者沉默来抑制蛋白质翻译过程,从而发挥调控各种特异性靶基因的表达的效应。
近年来研究发现,内皮特异性miR-126-3p,在血管完整性的维持、血管生成、胚胎血管发育等方面发挥着重要的作用。miR-126-3p基因敲除小鼠可出现血管破裂、出血,部分胚胎致死。已有研究结果证明,在脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中,SPRED-1(sprouty-related EVHl domain-containing protein 1)和PIK3R2(phosphoinositol-3 kinaseregulatory subunit 2)是miR-126-3p的潜在靶基因,同时SPRED-1和PIK3R2基因是血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)上游的负性调节因子,而VEGF能够通过增强PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路调节EC细胞的增殖功能、迁移功能和成管能力等。
一项体外研究证明内皮微泡(EMPs)介导的miR-126-3p传递能够促进体外培养的冠状动脉内皮细胞的增生和迁移,相关体内实验证实miR-126-3p EMPs能够促进损伤动脉血管的再内皮化。多个有关循环miR-126-3p临床研究发现,血液中miR-126-3p的表达与某些心血管疾病密切相关。稳定性心绞痛CAD患者血清miR-126-3p表达量较正常人降低,miR-126-3p表达量与致死心肌梗死发生呈正相关;2型糖尿病(diabetes mellitus,DM)患者血浆miR-126-3p表达下降与DM患者血管并发症的发生相关。目前,miR-126-3p在移植静脉血管桥衰败中的角色尚不清楚,miR-126-3p对移植桥血管内膜增生和再内皮化的研究尚未见报道。研究探讨miR-126-3p在移植静脉血管病变中的作用有着巨大理论的意义和广阔的临床的应用前景,并可能掀起CABG手术后防治移植桥血管衰败的治疗策略的巨大变革。
参考文献
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[3]Establishment of a rat and guinea pig aortic interposition graft model reveals model specific patterns of intimal hyperplasia[J].Elaine K.Gregory,Janet M.Vercammen,Megan E.Flynn,Melina R.Kibbe.Journal of Vascular Surgery.2015
[4]miR-126 promotes angiogenesis and attenuates inflammation after contusion spinal cord injury in rats[J].Jianzhong Hu,Lei Zeng,Jianghu Huang,Guan Wang,Hongbin Lu.Brain Research.2015
[5]Achieving best outcomes for patients with cardiovascular disease in China by enhancing the quality of medical care and establishing a learning health-care system[J].Lixin Jiang,Harlan M Krumholz,Xi Li,Jing Li,Shengshou Hu.The Lancet.2015(1000)
[6]Reducing In-Stent Restenosis[J].Robert A.McDonald,Crawford A.Halliday,Ashley M.Miller,Louise A.Diver,Rachel S.Dakin,Jennifer Montgomery,Martin W.McBride,Simon Kennedy,John D.McClure,Keith E.Robertson,Gillian Douglas,Keith M.Channon,Keith G.Oldroyd,Andrew H.Baker.Journal of the American College of Cardiology.2015(21)
[7]屈庆喜.miR-126-3p对移植静脉桥血管再内皮化及内膜增生的临床和基础研究[D].山东大学,2018.