杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)是一种名贵古老的中药材,具有很高的药用价值。近年来，我国杜仲林发展迅速,已达27万hm2以上,其中大部分林木已经开花结果,大量的杜仲种子形成了一种新的资源。杜仲的果实为翅果,长椭圆型,内有果仁。杜仲果仁富含亚麻酸和多种生物活性物质,桃叶珊瑚苷是一种环烯醚萜苷化合物,是杜仲种子的苦味素物质之一,也是杜仲种子中含量较高的活性物质,有清湿热、利小便的功效,并且桃叶珊瑚苷的苷元及其多聚体具有抗菌作用,是一种抗菌素。桃叶珊瑚苷还表现出明显的保肝活性,能明显抑制乙型肝炎病毒DNA复制[;抗肌肉骨骼老化等多种药理作用。国内外研究桃叶珊瑚苷提取时多用车前草、杜仲叶等为原料,提取方法主要是溶剂浸取法,用水、甲醇、乙醇为提取剂,而超临界CO2流体萃取法方面的研究未见报道,本研究运用超临界CO2流体萃取技术探讨杜仲果仁中桃叶珊瑚苷的提取工艺条件,为杜仲种子的开发利用提供依据。
提取方法
称取100g样品,加入约200mL夹带剂拌匀,在40~50℃条件下浸泡30min,碾碎后风干、装入萃取釜进行超临界CO2萃取,萃取开始后不断加入夹带剂,控制夹带剂的加入速度在10mL/min左右,选取萃取压力、萃取温度、分离温度、萃取时间、夹带剂用量等因素进行正交工艺设计，将各次试验得到的萃取液进行桃叶珊瑚苷含量测定。
根据极差分析结果,优选出的超临界CO2提取杜仲果仁中桃叶珊瑚苷最佳工艺为A3B3C2D2E3,即萃取压力26MPa、萃取温度55℃、分离温度30℃、萃取时间120min、75%的乙醇作为夹带剂,用量为600mL。原组合中没有该工艺组合,按照此条件重复3次实验,测得桃叶珊蝴苷的得率为1.921%,优于正交工艺设计中的任意一个组合[1]。
检测方法[1]
1.桃叶珊瑚苷标准曲线
准确称取桃叶珊瑚苷标准品5.2mg,用甲醇溶解并定容至10mL得到质量浓度为0.52g/L的桃叶珊瑚苷甲醇溶液,取该溶液1mL,用50%的甲醇稀释至25mL,得到质量浓度为0.0208g/L的桃叶珊瑚苷标准溶液。按照逐级稀释法分别得到0.0208、0.0104、0.0052、0.0026、0.0013、0.0007g/L的标准待测液,分别取这些溶液1mL,各加入95%乙醇2mL,Epstahl试剂1mL,冰醋酸1mL,加水定容至10mL,在75℃水浴中显色20min,冷水浴冷却3min,以75%乙醇作参比在596nm测定其吸光度，以桃叶珊瑚苷含量对吸光度做曲线,其线性方程:Y=0.09804X-0.00004,r=0.9995。式中,Y为溶液中桃叶珊瑚苷的含量;X为所测得的吸光度值;线性范围:0~0.02mg。
2.桃叶珊瑚苷的含量测定
采用Epstahl试剂显色比色法,取一定浓度的桃叶珊瑚苷溶液1mL,加入95%乙醇2mL,Epstahl试剂1mL,冰醋酸1mL,加水定容至10mL,在75℃水浴中显色20 min,冷水冷却3min,以75%乙醇作参比于596nm测定其吸光度，并对照标准曲线方程计算出桃叶珊瑚苷的量。
参考文献
[1]张永康,胡江宇,李辉,等. 超临界二氧化碳萃取杜仲果实中桃叶珊瑚苷工艺研究[J]. 林产化学与工业,2006,26(4):113-116. DOI:10.3321/j.issn:0253-2417.2006.04.028.