TRAIL是肿瘤坏死因子超家族成员，核心功能是特异性诱导肿瘤细胞、异常活化细胞凋亡，且对正常细胞毒性极低，因此成为肿瘤治疗、免疫调控等领域的研究热点。而TRAIL抗体是针对TRAIL蛋白（或其受体）的特异性免疫球蛋白，通过结合 TRAIL 或其受体（如 DR4/DR5）调控凋亡通路，在基础研究、疾病诊断与治疗中具有重要价值。
制备方法
1、TRAIL原核表达载体的构建
质粒载体pPreTMH-Tb与TRAILcDNA经限制性酶BamH I,Xba I双酶切后,行琼脂糖凝胶电泳分离,根据试剂盒进行胶回收。取纯化的TRAILcDNA片段9ul,pPre-TMHTb空载体3ul，T4DNA连接酶2ul，Buffer 1ul，ddH2O补至总体积20ul,16℃连接过夜。次日将连接产物转化感受态大肠杆菌DH-5α,涂布于含100ug/ml的氨苄青霉素(AP)LB板,37℃倒置过夜后，挑选菌落进行鉴定。重组表达质粒命名为pPTb/TL。
2、pPTb/TL重组体的酶切鉴定
常规小规模抽提质粒pPTb/TL后,根据下列体系进行酶切鉴定:pPTb/TL 5ul，10xBuffer 1ul, BamH I与Xba I各1ul,用ddH2O补至总体积20uI,混匀后37℃水浴90min。取20ul酶切产物行1%琼脂糖凝胶电泳,于紫外灯下观察结果。鉴定正确后质粒扩增，并行AB1377全自动测序仪测定DNA序列。
3、TRAIL基因在大肠杆菌中表达
挑取已鉴定正确的pPTb/TL克隆接种于含AP的LB烧瓶中,37℃摇振至菌液A590达0.5~1.0加IPTG至终浓度0.5mmol/L,继续培养6h,同时诱导空载体pPreTMH-Tb。取1ml菌液,5000/min离心5min,100ul PBS重悬菌体。取上述样本10ul加入等体积的上样缓冲液100℃变性3min,上样行SDS-PAGE凝胶电泳,分析TRAIL基因在大肠杆菌DH-5a的表达情况，并用薄层扫描仪计算TRAIL蛋白在菌体总蛋白质中的百分含量。
4、TRAIL抗体的制备
将TRAIL蛋白条带从PAGE凝胶中切下,用等量弗氏完全佐剂乳化后于家兔背部皮下多点注射,这是初次免疫。5周后用1/3初次免疫量的蛋白-佐剂混合物于兔子大腿肌肉加强免疫,7~10d后耳缘静脉取血,检测TRAIL抗体的产生。
参考文献
[1]方琴,孙等军,张旭,等. TRAIL基因原核表达载体的构建、表达与抗体制备[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志,2004,11(1):50-53. DOI:10.3872/j.issn.1007-385X.2004.01.013.