4-氯去氢甲基睾酮别名：去氢氯甲基睾酮，CAS：2446‑23‑3，白色至类白色结晶粉末，熔点：149‑151℃，溶于甲醇、乙醇、乙腈；脂溶性；几乎不溶于水，主要用于兴奋剂检测对照品、毒理学、甾体化学研究。
研究表明用参附注射液加小剂量4-氯去氢甲基睾酮辩证治疗肾阳虚再生障碍性贫血有一定效果。目前,对4-氯去氢甲基睾酮的含量测定方法尚未见诸于国内文献报道,本文采用高效液相色谱法,测定4-氯去氢甲基睾酮片剂中4-氯去氢甲基睾酮的含量及其均匀度,取得了较为理想的效果。
检测方法
1、色谱条件色谱柱为Gemini 5um C18分析柱,以甲醇:水(60:40)为流动相,流速为1ml/min,柱温30℃,检测波长254nm,进样量20ul；
2、溶液浓度的计算与配制
对照品储备液的配制：需配制的储备液的浓度大约为1.6mg/ml储备液实际浓度1.6044mg/ml；
对照品溶液的配制：精密称取4-氯去氢甲基睾酮对照品粉10.0mg于10ml容量瓶中,加甲醇定容至刻度,配成1mg/ml的对照品溶液；
供试品溶液的配制：取4-氯去氢甲基睾酮供试品5片,精密称定其总质量以及单片质量。然后将其置于玛瑙研钵中研细,精密称取20.0mg于10ml容量瓶中,加8ml甲醇,超声提取30min,放置，冷却。再用甲醇稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液为供试品溶液。
结果
1、系统适用性
试验取浓度均为0.08mg/ml的对照品和供试品溶液分别进样20ul以供试品作标准计算理论塔板数,按峰面积计算校正因子。结果如表1所示。表1说明了色谱柱的固定相系统适合于分析供试品。
2、线性范围
实验取1.6044mg/ml的储备液,用甲醇配成浓度分别为0.80、0.60、0.40、0.20、0.10、0.08、0.06、0.04、0.02、0.01mg/ml的对照品溶液。10个不同浓度的对照品溶液分别以20ul进样,每个浓度重复进样3次。以平均峰面积A对浓度C作图,得4-氯去氢甲基睾酮的标准曲线，如图所示。其线性相关系数r=0.9999，表明4-氯去氢甲基睾酮在0.01~0.80mg/ml浓度范围内线性良好。
3、稳定性试验
精密称取10.0mg已研磨成粉状的供试品，按所述方法配制成供试品溶液,分别于0、1、3、7、15、32、48h后进样。对浓度为0.08mg/ml的对照品溶液,也以上述时间间隔进样,进样量均为20ul，结果表明4-氯去氢甲基睾酮稳定性良好。
4、精密度试验
日内RSD试验：取浓度为0.08mg/ml的对照品溶液，以20ul重复进样6次,测定峰面积,得对照品的RSD为0.52%。
分别精密称取10.0mg已研磨成粉状的供试品,按供试品配制的方法配制6份溶液。以20ul分别进样1次,测定峰面积。得供试品的RSD为1.42%。
日间RSD试验：于当日、第2日、第3日分别按供试品溶液的配制方法配制供试品溶液各1份，3日内分别重复进样3次，测定峰面积。得到供试品的日间RSD为0.21%。
加标回收率试验：精密称取10.0mg供试品3份,分别置于10ml容量瓶中。于3个容量瓶中分别加入0.04mg/ml的对照品溶液1、2、4ml加甲醇至8ml超声提取30min放冷。再用甲醇稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液为供试品溶液。以20ul分别进样5次,测峰面积。计算回收率以及RSD。
含量均匀度实验：取4-氯去氢甲基睾酮供试品1片,精密称定后置于玛瑙研钵中,加少量流动相湿润研磨,定量转移至50ml容量瓶中，加20ml甲醇,超声提取30min后,放冷。再用甲醇稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液20ul进样，同法共测定10片供试品，一共测2批片剂。实验结果表明2批样品的含量均匀度均为合格[1]。
参考文献
[1]龚燕.4-氯去氢甲基睾酮含量的反相高效液相色谱测定法[J].职业与健康,2009,25(2):151-152.DOI:10.13329/j.cnki.zyyjk.2009.02.059?.