(4S)-6-(4-氯苯基)-N-乙基-8-甲氧基-1-甲基-4H-[1,2,4]三唑并[4,3-A][1,4]苯并二氮杂卓-4-乙酰胺

I-BET-762是一种BET (bromodomain and extra terminal domain)蛋白抑制剂， IC50约为35 nM，抑制巨噬细胞产生促炎蛋白，抑制急性炎症，对其他溴区结合域包含的蛋白具有高度的选择性。I-BET-762抑制BET(溴区和额外的末端结构域) 蛋白, BRD2, BRD3 和 BRD4, 结合到BET的串联溴区，K_d为50.5-61.3 nM, 在FRET分析中，置换BET串联溴区的一种四乙酰化的H4肽，IC50为32.5-42.5 nM。I-BET-762占据BET蛋白的乙酰基-赖氨酸结合口袋，并抑制BET蛋白结合到乙酰化的组蛋白，从而破坏了炎性基因表达必不可少的染色质复合物的形成。分化过程中的第2天使用I-BET-762处理，改变CD4⁺T细胞的细胞因子产生，上调一些抗炎基因产物的表达，并下调一些促炎细胞因子的表达。I-BET-762保护防止脂多糖诱导的内毒素休克和细菌诱导的脓毒病。LPS注射后1.5小时，单剂量I-BET处理，可治愈小鼠。I-BET每日两次注射，持续2天，保护小鼠免于脓毒症引起的死亡。早期I-BET-762处理实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型，抑制Th1分化的2D2 T细胞诱发神经性炎症的能力。Molibresib (I-BET-762, GSK525762, GSK525762A) 是一种BET蛋白抑制剂，无细胞试验中IC50约为35 nM，抑制巨噬细胞产生促炎性蛋白质，并抑制急性炎症，对其他溴区结合域包含的蛋白具有高度选择性。

Target	Value
BET proteins (Cell-free assay)	35 nM

I-BET-762抑制BET(溴区和额外的末端结构域) 蛋白, BRD2, BRD3 和 BRD4, 结合到BET的串联溴区，K _d 为50.5-61.3 nM, 在FRET分析中，置换BET串联溴区的一种四乙酰化的H4肽，IC50为32.5-42.5 nM。I-BET-762占据BET蛋白的乙酰基-赖氨酸结合口袋，并抑制BET蛋白结合到乙酰化的组蛋白，从而破坏了炎性基因表达必不可少的染色质复合物的形成。分化过程中的第2天使用I-BET-762处理，改变CD4

I-BET-762保护防止脂多糖诱导的内毒素休克和细菌诱导的脓毒病。LPS注射后1.5小时，单剂量I-BET处理，可治愈小鼠。I-BET每日两次注射，持续2天，保护小鼠免于脓毒症引起的死亡。早期I-BET-762处理实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型，抑制Th1分化的2D2 T细胞诱发神经性炎症的能力。

实施例1：将(S)-2-(6-(4-氯苯基)-8-甲氧基-1-甲基-4H-苯并[f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-4-基)乙酸（16.0 g，40 mmol）溶于THF中，加入N,N-二异丙基乙胺（DIEA，14 mL，80 mmol），随后加入1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐（HATU，30.4 g，80 mmol）。反应混合物在室温下搅拌3小时，然后加入乙胺的THF溶液（40 mL，2 M，80 mmol）。继续搅拌48小时后，减压浓缩反应混合物。将粗产物悬浮于水中，用二氯甲烷（DCM）萃取。有机层用无水硫酸钠（Na2SO4）干燥，过滤后减压浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱（DCM/MeOH，95:5）纯化，所得固体在乙腈（MeCN）中重结晶。随后，将固体溶解于DCM中，并用二异丙醚（1-Pr2O）沉淀，得到(S)-2-(6-(4-氯苯基)-8-甲氧基-1-甲基-4H-苯并[f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂卓-4-基)-N-乙基乙酰胺（8 g，收率47%）为白色固体。Rf = 0.48（DCM/MeOH，90:10）。熔点 >140°C（变粘）。1H NMR（300 MHz，CDCl3）δ 7.53-7.47（m，2H），7.39（d，J = 8.9 Hz，1H），7.37-7.31（m，2H），7.20（dd，J = 2.9，8.9 Hz，1H），6.86（d，J = 2.9 Hz，1H），6.40（m，1H），4.62（m，1H），3.80（s，3H），3.51（dd，J = 7.3，14.1 Hz，1H），3.46-3.21（m，3H），2.62（s，3H），1.19（t，J = 7.3 Hz，3H）。LC/MS：m/z 424 [M(35Cl)+H]+，保留时间2.33分钟。

参考文献：

[1] Patent: WO2011/54553, 2011, A1. Location in patent: Page/Page column 26

[2] Patent: WO2011/54845, 2011, A1. Location in patent: Page/Page column 55-56

[3] Patent: US2012/220573, 2012, A1. Location in patent: Page/Page column 11-12

[4] Journal of Medicinal Chemistry, 2013, vol. 56, # 19, p. 7501 - 7515